老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s


，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二

、免疫荧光鉴定

：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠嗅球分离自嗅球组织；嗅球是脊椎动物前脑结构中参与嗅觉的部分，用于感知气味
。嗅球分为二个不同的结构：主嗅球及辅助嗅球。在大脑额叶来自许多嗅细胞的神经纤维缠集在一起，形成线球状的部分。在这里，纤维与多个次级神经元——僧帽细胞的树突相连接，进而由这里伸出神经纤维形成嗅囊
，终止于额叶下方
。一般认为它在嗅味的辨别中具有重要的功能。对于大部份的脊椎动物而言

，嗅球位在大脑的前面，不过人的嗅球位于大脑的内部。嗅球由筛骨的筛板固定且保护嗅球，哺乳动物的筛板会分隔嗅球和嗅上皮
，而嗅神经会穿过筛板中的筛孔而连接到嗅球。嗅球分为二个不同的结构：主嗅球及辅助嗅球。

方法简介：

实验室分离的小鼠嗅球采用消化法结合神经元专用培养基培养、化学试剂抑制法筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠嗅球经MAP-2免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件
：PLL（0.1mg/ml）

培养基
：含B-27 Supplement
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2天半量换液1次

生长特性：贴壁

细胞形态：神经元细胞样

传代特性：不传代，不增殖，存活1-2周

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%；CO2，5%

小鼠嗅球体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1

：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠细胞外信号调节激酶2(ERK2)检测试剂盒 ，英文名
： ERK2 ELISA Kit

Mouse nerve growth guidance factor Slit2 ELISA Kit 小鼠神经生长导向因子Slit2 检测试剂盒

MouseCollageypeⅡ,ColⅡELISAKit 小鼠Ⅱ型胶原(ColⅡ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HSV-IIgG单疱疹Ⅰ型病毒IgG(间接法二步法)

细胞ITK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-3大鼠白介素3

SERPINB6B重组小鼠 Serpinb6b 蛋白 Protein

白介素12受体β2(IL2Rβ2)重组蛋白 Recombinant Interleukin 12 Receptor Beta 2 (IL12Rb2)

SAE1重组人 SAE1 蛋白 Protein

DPP10 Protein Human 重组人 DPP10 / DPRP3 蛋白

TNFSF4 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 OX-40L / TNFSF4 蛋白 (Fc 标签)

N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)重组蛋白 Recombinant N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase (NAGase)

DPP10 Protein Human 重组人 DPP10 / DPRP3 蛋白

F9重组小鼠 Coagulation Factor IX / FIX / F9 蛋白 Protein

TNFRSF21 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 TNFRSF21 / DR6 蛋白

PTH重组人 PTH / PTH1 / Parathyroid Hormone 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)检测试剂盒 96T/48T

Human aldosterone (ALD) ELISA Kit 人固酮(ALD)检测试剂盒

Humanisletamyloidpolypeptide,IAPPELISAKit 人胰岛淀粉样多肽(IAPP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAndrogenBindingProtein,ABP检测试剂盒人雄激素结合蛋白(ABP)检测试剂盒规格：96T/48T

植物二酚氧化酶(diphenolase)活性比色法定量检测试剂盒20次

MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISAKit猴载脂蛋白B100(apo-B100)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠嗅球细胞小鼠骨钙素   英文名称：   Osteocalcin   规格：      英文缩写：   OC

小鼠抑瘤素   英文名称
：    M   规格
：      英文缩写：   OSM

小鼠催产素   英文名称：   Oxytocin   规格：      英文缩写
：   OT

小鼠骨保护素配体   英文名称：   Osteoprotegerin ligand   规格：      英文缩写：   OPGL