實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠毛囊幹分離自皮膚毛囊組織；毛囊是表皮細胞連續形成的袋樣上皮 。其基底是真皮凹進的真皮毛乳頭 ，中心是一根毛發 ，立毛肌的一側斜附在毛囊壁上 ，附著點的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸 ，毛囊在皮膚表麵的開口是毛囊孔 。毛囊位於真皮和皮下組織中 ，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度 ，它是由包繞毛發與表皮相連的上皮鞘 ，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個結構比較複雜的器官附件組織 。毛囊幹細胞是在毛囊外根鞘隆突部中的一種細胞 。毛囊幹細胞屬於成體幹細胞 ，在體內處於靜止狀態 ，在體外培養作用下表現出驚人的增殖能力 。研究發現 ，毛囊幹細胞具有多向分化潛能 ，它可以分化成表皮 、毛囊 、皮脂腺 ，參與皮膚創傷愈合的過程 。毛囊幹細胞和其它成體幹細胞一樣 ，具有慢周期性 、未分化性 、自我更新和體外增殖能力強等特點 。毛囊幹細胞分化經毛囊幹細胞(hair follicle stem cells ，FSC) 、短暫增殖細胞(transit amplifying cells ，TAC)有絲分裂後分化細胞(postmitotic differentiating cells ，PDC)三個階段 。毛囊幹細胞在光鏡下呈立方形 ，細胞體積小 ，核漿比率大 ，表麵光滑 ，皺褶少 ，又被稱為非鋸齒形細胞 ，細胞體積的增大與增殖能力呈負相關 。超微結構顯示細胞表麵有少許微絨毛 ，細胞核存在許多卷曲 ，染色質彌散分布 ，這些形態特征均表現出原始細胞的特性 。

方法簡介 ：

實驗室分離的小鼠毛囊幹采用膠原酶 - 聯合消化製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的小鼠毛囊幹經CD34免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：梭形 、多角形

傳代特性 ：可傳3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

小鼠毛囊幹體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

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小鼠紅細胞生成素受體(EPOR)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat phospholipase A2 (PL-A2) ELISA Kit 大鼠0脂酶A2(PL-A2)試劑盒

humandopamine,DAELISAKIT 人多巴胺(DA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAi-myocardialaibody,AMA試劑盒人抗心肌抗體(AMA)試劑盒規格 ：96T/48T

植物染色質免疫沉澱分析(CHIP)試劑盒10次

HumanUlasensitivityi-iodothyronine ，u-T3ELISAKit人高敏三甲狀腺原(u-T3)試劑盒規格 ：96T/48T

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H5N1-H5 H5亞型全病毒 1mgH5N1-H5 H5亞型全病毒

RPS6KA2重組人 RSK3 / RPS6KA2 蛋白 (GST 標簽) Protein

EZR Protein Human 重組人 EZR / VIL2 / Ezrin 蛋白

EPHB1 Protein Mouse 重組小鼠 EphB1 / EPHT2 蛋白

H5N1-H5 H5亞型全病毒 1mgH5N1-H5 H5亞型全病毒

EZR Protein Human 重組人 EZR / VIL2 / Ezrin 蛋白

EFNB1重組大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 Protein

EPHB1 Protein Mouse 重組小鼠 EphB1 / EPHT2 蛋白

RPS6KA2重組人 RSK3 / RPS6KA2 蛋白 (GST 標簽) Protein

小鼠毛囊幹細胞大鼠肝素蛋白聚糖(HSPG)試劑盒  ，英文名 ： HSPG ELISA Kit

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Ratmalondialchehyche,MDAELISAKit 大鼠二(MDA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforG-CSF(HumanGranulocyteColonyStimulatingFactor)ELISAKit人粒細胞集落刺激因子

細胞穀同酸轉氨酶(GPT)活性光譜法定量試劑盒20次

Raudimealbovineserumalbumincheck-upELISAKit大鼠的牛血清白蛋白殘留檢測試劑盒規格 ：96T/48T