細胞簡介 ：

小鼠脈絡膜血管內皮分離自眼球脈絡膜組織 ；脈絡膜在視網膜和鞏膜之間 ，含有豐富血管和色素細胞 ，對外力衝擊的耐受性較視網膜差 ，當眼球受到從前麵來的外力的衝擊作用通過玻璃體傳到後極部時 ，堅硬的鞏膜在其外麵又有抵抗作用 ，使脈絡膜在內外兩種作用夾攻下而發生破裂和出血 。脈絡膜呈暗褐色 ，圍繞視神經乳頭部有照膜 ，為青綠色帶金屬光澤的三角形區 。脈絡膜是眼球中膜的後2/3處的薄膜 ，由纖維組織 、小血管和毛細血管組成 ，軟而薄 ，棕紅色 ，在鞏膜和視網膜之間 ，續連於睫狀體後方 。脈絡膜的血循環營養視網膜外層 ，其含有的豐富色素起遮光暗房作用 。主要功能是營養視網膜外層及玻璃體 ，並有遮光作用 ，使反射的物象清楚 。同時對視覺係統起保護作用 ，對整個視覺神經有調節作用 。續連於睫狀體後方 ，含豐富的血管和色素細胞 ，有營養和遮光作用 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠脈絡膜血管內皮采用膠原酶-混合消化法並通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠脈絡膜血管內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠α肌動蛋白(α Actin)檢測試劑盒  ，英文名 ： α Actin ELISA Kit

Mouse prolactin (PRL) ELISA Kit 小鼠催乳素(PRL)檢測試劑盒

ELISA 小鼠血小板生長因子受體α(mouse PDGF sRα)  進口分裝

CLIAKitforIg-j(Humanimmunoglubinjoiningchain)ELISAKitj鏈

通用型牛傳染性鼻氣管(InfectiousBovineRhinoacheitis;IBR/ BovineHerpesvirus-1;BHV-1)試劑盒20次

ELISAKitCT-1大鼠心肌營養素1

CD2重組狗 CD2 蛋白 Protein

Newcastle disease virus 雞新城疫疫苗(雞瘟4型混合病毒 1mlNewcastle disease virus 雞新城疫疫苗(雞瘟4型混合病毒)

CD83重組人 CD83 / HB15 蛋白 Protein

CTRL Protein Human 重組人 CTRL-1 / CTRL / Chymotrypsin-like protease 蛋白

ICAM2 Protein Mouse 重組小鼠 ICAM-2 / CD102 蛋白

Newcastle disease virus 雞新城疫疫苗(雞瘟4型混合病毒 1mlNewcastle disease virus 雞新城疫疫苗(雞瘟4型混合病毒)

CTRL Protein Human 重組人 CTRL-1 / CTRL / Chymotrypsin-like protease 蛋白

CD2重組狗 CD2 蛋白 Protein

ICAM2 Protein Mouse 重組小鼠 ICAM-2 / CD102 蛋白

CD83重組人 CD83 / HB15 蛋白 Protein

小鼠膜聯蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human osteoclast differeiation factor (ODF) ELISA Kit 人破骨細胞分化因子(ODF)檢測試劑盒

Humanmembranecofactorprotein,MCPELISAKit 人膜輔蛋白(MCP/CD46)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanacetylcholine,ACH檢測試劑盒人乙酰(ACH)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

正常人體腸組織微粒體組分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-cardiolipinaibodyIgM,ACA-IgMELISAKit小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠脈絡膜血管內皮細胞小鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗肌內膜抗體IgA(EMAIgA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。