老哥俱乐部

① 组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层
，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化
，可采用低速离心分离，直接培养

，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养
。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后
，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养
，器官培养可保持器官组织的相对完整性
，可用于重点观察细胞间的联系
、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

小鼠毛囊分离自皮肤毛囊组织
；毛囊是表皮细胞连续形成的袋样上皮。其基底是真皮凹进的真皮毛乳头，中心是一根毛发，立毛肌的一侧斜附在毛囊壁上
，附着点的上方为皮脂腺通入毛囊的短颈，毛囊在皮肤表面的开口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下组织中，毛囊向下伸入真皮约有一厘米深度，它是由包绕毛发与表皮相连的上皮鞘
，以及皮脂腺和立毛肌所组成的一个结构比较复杂的器官附件组织
。毛囊实际上是由结缔组织和上皮两部分所组成，除了具有结缔组织和血管的真皮乳头（毛乳头）外，毛囊其余部分都是由表皮细胞分化而来。毛囊开口起始于皮肤表面，而每个毛囊又和一个或多个腺胞相连
。每个腺胞解离成富含脂质的物质，却又通过一个共同和毛囊相通连的皮脂腺导管将分泌物运送到皮肤表面排出
。

公司实验室分离的小鼠毛囊采用-胶原酶联合消化法制备而来制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠毛囊经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定

，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

取材→分离→培养和维持

1、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型、分化程度、年龄等

⑥ 作好记录

2、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液、羊水
、胸水或腹水的悬液材料，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟

。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层
，这样可根据需要收获目的细胞。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料
，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液
，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法
。

① 机械分散法

特点:简便

、快速,但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)
，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法
，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡
，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后

，细胞容易贴壁生长
。

大鼠硫氧还蛋白还原酶1(xR1)检测试剂盒 
，英文名： xR1 ELISA Kit

Mouse proinsulin (PI) ELISA Kit 小鼠胰岛素原(PI)检测试剂盒

RatSuperOxidaseDimase,SODELISAKit 大鼠超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGDH/GLDH(HumanGlamatedehydrogenase)ELISAKit人谷脱氢酶

细胞元素荧光定量检测试剂盒20次

RatsecretedphospholipaseA2,sPLA2ELISAKit大鼠分泌型0脂酶A2(sPLA2)检测试剂盒规格：96T/48T

PDCD1重组小鼠 PD1 / PDCD1 蛋白 Protein

Cecropin 抗菌肽/天蚕素(多肽 0.5mgCecropin 抗菌肽/天蚕素(多肽)

KYNU重组人 KYNU / Kynureninase 蛋白 Protein

CTSD Protein Human 重组人 Cathepsin D / CTSD 蛋白

CD226 Protein Mouse 重组小鼠 CD226 / DNAM-1 蛋白 (His & Fc 标签)

Cecropin 抗菌肽/天蚕素(多肽 0.5mgCecropin 抗菌肽/天蚕素(多肽)

CTSD Protein Human 重组人 Cathepsin D / CTSD 蛋白

PDCD1重组小鼠 PD1 / PDCD1 蛋白 Protein

CD226 Protein Mouse 重组小鼠 CD226 / DNAM-1 蛋白 (His & Fc 标签)

KYNU重组人 KYNU / Kynureninase 蛋白 Protein

小鼠苗条素受体(LR/Ob-R)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human tetanus aibody (Tetanus Ab) ELISA Kit 人破伤风抗体(Tetanus Ab)检测试剂盒

Humanfattyacid-bindingprotein,FABPELISAKit 人脂肪酸结合蛋白(FABP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAcetylcholinesterase,AChE检测试剂盒人乙酰酯酶(AChE)检测试剂盒规格：96T/48T

正常人体肾组织S9组分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-cardiolipinaibodyIgG,ACA-IgGELISAKit小鼠抗心0脂抗体IgG(ACA-IgG)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠毛囊细胞小鼠抗肌内膜抗体IgA(EMAIgA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠铁蛋白(FE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠酶2(CA-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁

。

本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗

，非药用，非食用