老哥俱乐部

实验报告
：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min

；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

小鼠枯否分离自肝脏组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化
、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下

，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方
，胃的上方。肝脏是机体消化系统中大的消化腺，为一红棕色的V字形器官
。肝脏是尿素合成的主要器官
，又是新陈代谢的重要器官


。肝脏在机体位置和形态结构
：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面
，大部分肝为肋弓所复盖
，仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁
，肝上面则与膈及腹前壁相接
。枯否氏细胞(Kupffer细胞)是肝脏的肝血窦内一些固定于窦壁的巨噬细胞
，它能吞噬和清除大部分从肠道来的抗原微粒，并能吞噬和清除肝血窦中的细菌、异物和衰老的红细胞
，并把血红蛋白分解成
。此外，肝巨噬细胞也有处理抗原
，诱导T细胞增殖，参与免疫调节的作用
。枯否氏细胞和一般巨噬细胞不同，枯否氏细胞不具有增加抗原免疫原性的能力
，相反有消除或减弱抗原性的作用。枯否氏细胞能吞噬来自血液循环的抗原抗体复合物和其他有害物质，以消除这些物质对机体的损害。枯否细胞功能障碍可导致肠源性内毒素血症。电镜下有很多皱褶和微绒毛。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠肝枯否采用混合酶灌流消化、低速离心
、密度梯度离心、差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肝枯否经CD68免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、巨噬细胞

传代特性 属于终末分化细胞
；属于不增殖细胞群

消化液 （12mM）

培养条件 气相：空气，95%；CO2

，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

大鼠脂素1(LPIN1)检测试剂盒 ，英文名

： LPIN1 ELISA Kit

Mouse soluble leptin receptor (sLR) ELISA Kit 小鼠可溶性瘦素受体(sLR)检测试剂盒

MouseGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISAKit 小鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforhumanHMGB-1ELISAKit人高迁移率族蛋白B1ELISAKit

B2高效液相色谱法定量检测试剂盒20次

ELISAKitGDNF大鼠胶质细胞系来源的神经营养因子

TSPAN1重组人 TSPAN1 蛋白 (aa 110-211, Fc 标签) Protein

Sox2 胚胎干细胞关键蛋白 0.5mgSox2 胚胎干细胞关键蛋白

EFNB1重组人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CSF2 Protein Human 重组人 GM-CSF / CSF2 蛋白

PLAU Protein Human 重组人 Urokinase / PLAU 蛋白

Somatostatin/GRIH 抗原 0.5mgSomatostatin/GRIH 抗原

CSF2 Protein Human 重组人 GM-CSF / CSF2 蛋白

TMEM25重组人 TMEM25 蛋白 Protein

PIGR Protein Human 重组人 PIGR 蛋白 (365 Ser/Gly, His 标签)

EFNB2重组人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

小鼠皮质酮/肾上腺酮(CO)ELISA 试剂盒 96T/48T

Prothrombin fragme F1+2 (F1+2) ELISA Kit 人原片段F1+2(F1+2)检测试剂盒

HumanCollagenaoaibody,CLAELISAKit 人抗胶原蛋白抗体(CLA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Human1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPG检测试剂盒人1,3-二0酸甘油酸(1,3-DPG)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞线粒体粗提分离试剂盒10次

MouseAzidothymidine,AZTELISAKit小鼠(AZT)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠肝枯否细胞小鼠类胰岛素生长因子结合蛋白-1(mouse IGFBP-1)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠类胰岛素生长因子结合蛋白-2(mouse IGBPF-2)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠类胰岛素生长因子结合蛋白-3(mouse IGBPF-3)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠IgA(mouse IgA)   作用：   ELISA   规格：      进口分装