細胞簡介 ：

小鼠肝非實質分離自肝髒組織 ；肝髒是身體內以代謝功能為主的一個器官 ，並在身體裏麵起著去氧化 、儲存肝糖 、分泌性蛋白質的合成等作用 ；肝髒也製造消化係統中之膽汁 。肝髒是機體內髒裏大的器官 ，位於機體中的腹部位置 ，在右側橫隔膜之下 ，位於膽囊之前端且於右邊腎髒的前方 ，胃的上方 。肝髒是機體消化係統中大的消化腺 ，為一紅棕色的V字形器官 。肝髒是尿素合成的主要器官 ，又是新陳代謝的重要器官。肝髒在機體位置和形態結構 ：肝髒位於右上腹 ，隱藏在右側膈下和肋骨深麵 ，大部分肝為肋弓所複蓋 ，僅在腹上區 、右肋弓間露出並直接接觸腹前壁 ，肝上麵則與膈及腹前壁相接 。肝實質細胞具有肝功能的單位 ，是肝髒的基本組成單位之一 。肝非實質細胞是指除了肝實質細胞之外的細胞 ，主要包含了肝竇內皮細胞 、肝星狀細胞 、肝枯否細胞 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠肝非實質采用取肝髒灌流 、膠原酶消化 、密度梯度離心法製備而來製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠肝非實質經過檢測 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態 圓形

傳代特性 不增殖 ；不傳代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠中期因子(MK)檢測試劑盒  ，英文名 ： MK ELISA Kit

Mouse soluble myosin heavy chain 1 (sMHC-1) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)檢測試劑盒

MouseFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISAKit 小鼠FMS樣酪激酶3(Flt3)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanH-rasELISAKit人H-ras

B1熒光定量檢測試劑盒20次

ELISAKitCav-1大鼠窖蛋白Caveolin1

TMEM25重組人 TMEM25 蛋白 Protein

Somatostatin/GRIH 抗原 0.5mgSomatostatin/GRIH 抗原

EFNB2重組人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白

PIGR Protein Human 重組人 PIGR 蛋白 (365 Ser/Gly, His 標簽)

Sox2 胚胎幹細胞關鍵蛋白 0.5mgSox2 胚胎幹細胞關鍵蛋白

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白

TSPAN1重組人 TSPAN1 蛋白 (aa 110-211, Fc 標簽) Protein

PLAU Protein Human 重組人 Urokinase / PLAU 蛋白

EFNB1重組人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

小鼠破骨細胞分化因子(ODF)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat somal cell derived factor 1 beta (SDF-1 beta /CXCL12) ELISA Kit 大鼠基質細胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)檢測試劑盒

Humanai-filaggrinaibody,AFAELISAKit 人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human1,25-dihydroxyvitaminD3,DVD/DHVD3檢測試劑盒人1,25二羥基3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD3)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母細胞線粒體DNA萃取試劑盒10/20次

MouseB-cellleukemia/lymphoma2,Bcl-2ELISAKit小鼠B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠肝非實質細胞小鼠粒細胞集落刺激因子(mouse G-CSF)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(mouse GM-CSF)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠巨噬細胞集落刺激因子(mouse M-CSF)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠(mouse Cytochrome C)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。