老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠肝非实质分离自肝脏组织
；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化
、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用
；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方
，胃的上方。肝脏是机体消化系统中大的消化腺
，为一红棕色的V字形器官
。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面
，大部分肝为肋弓所复盖，仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接。肝实质细胞具有肝功能的单位
，是肝脏的基本组成单位之一

。肝非实质细胞是指除了肝实质细胞之外的细胞，主要包含了肝窦内皮细胞、肝星状细胞、肝枯否细胞
。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠肝非实质采用取肝脏灌流、胶原酶消化、密度梯度离心法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肝非实质经过检测

，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 悬浮

细胞形态 圆形

传代特性 不增殖
；不传代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后

，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二

、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠中期因子(MK)检测试剂盒 ，英文名： MK ELISA Kit

Mouse soluble myosin heavy chain 1 (sMHC-1) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)检测试剂盒

MouseFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISAKit 小鼠FMS样酪激酶3(Flt3)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanH-rasELISAKit人H-ras

B1荧光定量检测试剂盒20次

ELISAKitCav-1大鼠窖蛋白Caveolin1

TMEM25重组人 TMEM25 蛋白 Protein

Somatostatin/GRIH 抗原 0.5mgSomatostatin/GRIH 抗原

EFNB2重组人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CSF2 Protein Human 重组人 GM-CSF / CSF2 蛋白

PIGR Protein Human 重组人 PIGR 蛋白 (365 Ser/Gly, His 标签)

Sox2 胚胎干细胞关键蛋白 0.5mgSox2 胚胎干细胞关键蛋白

CSF2 Protein Human 重组人 GM-CSF / CSF2 蛋白

TSPAN1重组人 TSPAN1 蛋白 (aa 110-211, Fc 标签) Protein

PLAU Protein Human 重组人 Urokinase / PLAU 蛋白

EFNB1重组人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

小鼠破骨细胞分化因子(ODF)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat somal cell derived factor 1 beta (SDF-1 beta /CXCL12) ELISA Kit 大鼠基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)检测试剂盒

Humanai-filaggrinaibody,AFAELISAKit 人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Human1,25-dihydroxyvitaminD3,DVD/DHVD3检测试剂盒人1,25二羟基3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD3)检测试剂盒规格
：96T/48T

真菌/酵母细胞线粒体DNA萃取试剂盒10/20次

MouseB-cellleukemia/lymphoma2,Bcl-2ELISAKit小鼠B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠肝非实质细胞小鼠粒细胞集落刺激因子(mouse G-CSF)   作用

：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mouse GM-CSF)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠巨噬细胞集落刺激因子(mouse M-CSF)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠(mouse Cytochrome C)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。