老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠肝动脉平滑肌分离自肝动脉组织；在胚胎期，肝脏有3条动脉供血
，分别来源于胃左动脉
、腹腔动脉和肠系膜上动脉

，这3条动脉分别的不同部位。出生后，一般保留一条动脉
，大部分为起源于腹腔动脉的动脉，由其分出左、右肝动脉供应左
、右半肝
。偶尔也可见起源于胃左动脉的动脉或起源于肠系膜上动脉的动脉。但也有2条动脉并存的情况
，如起源于腹腔动脉和起源于胃左动脉（25%），起源于腹腔动脉和起源于肠系腊上动脉（10%），而起源于胃左动脉和起源于肠系膜上动脉的2条动脉同时存在的情况比较少见
。此外，还有5%像胚胎期一样，3条动脉同时存在
。这种起源于腹腔动脉以外的肝动脉称为迷走肝动脉，如果肝脏没有起源于腹腔动脉的动脉供血时，此种异位起源的肝动脉称替代动脉
，如果在常见肝动脉类型外，还有一支这种异位起始的动脉的一部分血流
，这种肝动脉称副肝动脉。肝动脉平滑肌细胞是肝动脉的重要结构细胞之一
，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。肝动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展
，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形
、居中；2周后细胞汇合
，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富
，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长
，高低起伏


；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。血管平滑肌细胞的加速生长潜能是血管疾病进展的关键因素，新研究表明血管平滑肌细胞表达的ICAM-1和VCAM-1能促进血管壁的炎症反应，并且与血管疾病的发展及稳定性有关
。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠肝动脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肝动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV、HCV
、支原体、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS
、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠脂质运载蛋白1(LCN1)检测试剂盒 
，英文名

： LCN1 ELISA Kit

Mouse soluble myosin heavy chain 2 (sMHC-2) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重链2(sMHC-2)检测试剂盒

MouseFractalkine,FKELISAKit 小鼠趋化因子(FK)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanHomocysteine(Hcy)ELISAKit人血浆同型半胱

B2比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitKAF大鼠角化细胞内分泌因子

PDGFRA重组大鼠 PDGFRa / CD140a 蛋白 Protein

CYP450(Cytochrome P450 monooxygenase 0.5mgCYP450(Cytochrome P450 monooxygenase) 细胞色素P450单氧化酶(多肽抗原)

CCL21重组人 CCL21 / 6Ckine 蛋白 Protein

CSF1R Protein Human 重组人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & GST 标签)

SERPINA11 Protein Mouse 重组小鼠 SerpinA11 蛋白

CYP450(Cytochrome P450 monooxygenase 0.5mgCYP450(Cytochrome P450 monooxygenase) 细胞色素P450单氧化酶(多肽抗原)

CSF1R Protein Human 重组人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & GST 标签)

PDGFRA重组大鼠 PDGFRa / CD140a 蛋白 Protein

SERPINA11 Protein Mouse 重组小鼠 SerpinA11 蛋白

CCL21重组人 CCL21 / 6Ckine 蛋白 Protein

小鼠葡萄糖激酶(GCK)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human thrombin thrombomodulin complex regulation (T-TM) ELISA Kit 人血栓调节蛋白复合物(T-TM)检测试剂盒

HumanCollagen-likeBioproteinⅡ,HCBⅡELISAKit 人胶原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Heneggphosvitinphosphopeptides,PPP检测试剂盒鸡蛋卵黄高0蛋酸肽(PPP)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞线粒体DNA萃取试剂盒10/20次

MouseBeta-Endorphieceptor,β-EPRELISAKit小鼠β内啡肽受体(β-EPR)检测试剂盒规格
：96T/48T

小鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠淋巴球性脉络丛脑膜病毒抗体（LCM-Ab）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠酪蛋白酶检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装