老哥俱乐部

细胞简介

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小鼠肝动脉内皮分离自肝动脉组织；在胚胎期，肝脏有3条动脉供血，分别来源于胃左动脉、腹腔动脉和肠系膜上动脉，这3条动脉分别的不同部位。出生后，一般保留一条动脉
，大部分为起源于腹腔动脉的动脉，由其分出左
、右肝动脉供应左、右半肝
。偶尔也可见起源于胃左动脉的动脉或起源于肠系膜上动脉的动脉。但也有2条动脉并存的情况
，如起源于腹腔动脉和起源于胃左动脉（25%），起源于腹腔动脉和起源于肠系腊上动脉（10%），而起源于胃左动脉和起源于肠系膜上动脉的2条动脉同时存在的情况比较少见。此外，还有5%像胚胎期一样，3条动脉同时存在
。这种起源于腹腔动脉以外的肝动脉称为迷走肝动脉
，如果肝脏没有起源于腹腔动脉的动脉供血时，此种异位起源的肝动脉称替代动脉，如果在常见肝动脉类型外
，还有一支这种异位起始的动脉的一部分血流
，这种肝动脉称副肝动脉
。肝动脉内皮细胞是衬于肝动脉内表面的单层扁平上皮，在炎症时高表达黏附分子，与血流中白细胞表面黏附分子相互作用
，从而介导白细胞穿越血管壁
，亦属一类非专职抗原提呈细胞。它们吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织
，还参与集体免疫活动，包括：①血管收缩及血管舒张，从而控制血压；②凝血（血栓形成及纤维蛋白溶解）；③动脉硬化；④血管生成；⑤炎症及肿胀（浮肿）
；⑥内皮细胞亦控制一些物质，如白血球进出血管
。

方法简介

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公司实验室分离的小鼠肝动脉内皮采用混合酶消化法结合差速贴壁法，并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肝动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV

、HCV

、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一

、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6

、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)检测试剂盒 ，英文名： TNFα ELISA Kit

Mouse soluble P selectin (sP-selectin) ELISA Kit 小鼠可溶性P选择素(sP-selectin)检测试剂盒

MouseErythropoietin,EPOELISAKit 小鼠红细胞生成素(EPO)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanImmunoglobulinA,IgAELISAKitA

微型RNA(miRNA)文库构建技术试剂盒5次

ELISAKitMT大鼠金属硫蛋白

F3重组大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白 Protein

ER-alpha 雌激素受体alpha 0.5mgER-alpha 雌激素受体alpha

IGFBP6重组人 IGFBP6 / IBP-6 蛋白 Protein

CSF1R Protein Human 重组人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (aa 543-922, His & GST 标签)

CEACAM1 Protein Mouse 重组小鼠 CEACAM1 / CD66a 蛋白

ER-alpha 雌激素受体alpha 0.5mgER-alpha 雌激素受体alpha

CSF1R Protein Human 重组人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (aa 543-922, His & GST 标签)

F3重组大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白 Protein

CEACAM1 Protein Mouse 重组小鼠 CEACAM1 / CD66a 蛋白

IGFBP6重组人 IGFBP6 / IBP-6 蛋白 Protein

小鼠葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat somal cell derived factor 1A (SDF-1a/CXCL12) ELISA Kit 大鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)检测试剂盒

Humanai-cyclicciullinatedpeptide,CCPELISAKit 人抗环胍肽抗体(CCP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HeneggImmunoglobulinofYolk,IgY检测试剂盒鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞细胞壁分离试剂盒20次

mouseBeta-Endorphin,β-EPELISAKit小鼠β内啡肽(β-EP)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠肝动脉内皮细胞小鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠透明质酸(HA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担


。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。