實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

兔腎足突分離自腎組織 ；腎小球是腎元中的用於將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢 ，被鮑氏囊所包裹 ，是尿液形成的重要構造 。血液經由入球小動脈進入腎小球 。腎小球內的微血管不像其他微血管 ，匯流入靜脈 ，而是流入出球小動脈 。在腎小球內 ，微血管受到高壓 ，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進行 。微血管中的血液經由超濾作用之後 ，形成濾液 ，滲入鮑氏囊內 。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體 ，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率 。足細胞（podocyte）即腎小囊髒層上皮細胞 ，它附著於腎小球基底膜（GBM）的外側 ，連同GBM和毛細血管內皮一起構成了腎小球血液濾過屏障 。足細胞特殊的解剖位置 ，使得其體內研究較為困難 ；又由於正常成年機體的腎髒足細胞是一種終末分化細胞 ，體外培養的原代細胞不能增殖 。足細胞呈星型多突狀 ，胞體較大，由胞體伸出許多突起 ，又稱足突（FP） ，呈指狀交叉複蓋於GBM外表麵 ，並通過黏附分子和蛋白多糖分子與GBM相連 。足細胞在正常情況下可以分泌GBM的主要組成成分 ，IV型膠原和纖維連接蛋白（FN） ；在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解GBM作用的基質金屬蛋白酶（MMPs）和組織蛋白酶 ，從而在GBM的代謝平衡中發揮重要作用 。足細胞之間鄰近的足突相互交替 ，形成了許多30-40nm的裂孔 ，孔上覆蓋一層厚4-6nm的裂孔隔膜 ，即腎小球足突間裂孔隔膜 。後者是血漿蛋白通過脈管係統的後屏障 ，對於維持腎小球濾過屏障結構與功能完整性發揮關鍵作用 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔腎足突采用機械研磨過不同孔徑不鏽鋼網篩結合膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔腎足突經PCK免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 ：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態：上皮細胞樣

傳代特性 ：可傳1-2代

消化液 ：0.25%

培養條件：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔腎足突體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠單酰脫羧酶(MLYCD)檢測試劑盒  ，英文名 ： MLYCD ELISA Kit

Mouse alpha N has amido glucosidase (alpha NAG) ELISA Kit 小鼠αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)檢測試劑盒

ELISA 小鼠血管內皮抑素(mouse Endostatin)  進口分裝

CLIAKitforKLK10(HumanKallikrein10)ELISAKit人10

通用型大腸杆菌(E.Coli)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20次

ELISAKitTBA大鼠總膽汁酸

IL6ST重組小鼠 IL6ST / gp130 / CD130 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

白介素23(IL23)重組蛋白 Recombinant Interleukin 23 (IL23)

SRFBP1重組人 SRFBP1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

HSF1 Protein Human 重組人 HSF1 / HSTF1 蛋白

CD160 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD160 蛋白 (Fc 標簽)

白介素23(IL23)重組蛋白 Recombinant Interleukin 23 (IL23)

HSF1 Protein Human 重組人 HSF1 / HSTF1 蛋白

IL6ST重組小鼠 IL6ST / gp130 / CD130 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

CD160 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD160 蛋白 (Fc 標簽)

SRFBP1重組人 SRFBP1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

小鼠C型尿肽(CNP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat vitamin D2 (VD2) ELISA Kit 大鼠2(VD2)檢測試劑盒

HumanInhibin,INH-AELISAKit 人抑製素A(INH-A)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humancoloncancer-specificaigen-3,CCSA-3檢測試劑盒人大腸癌專一抗原3(CCSA-3)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織ATP生物發光法定量檢測試劑盒50次

Humanpyruvatedehydrogenase-E1,PDHE1ELISAKit人同酸脫氫酶E1(PDHE1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔腎足突細胞兔肌鈣蛋白Ⅰ檢測試劑盒   兔肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒   規格型號 ：96T/48T   兔肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：兔肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒 、兔肌鈣蛋白Ⅰ 檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

兔環0酸腺苷檢測試劑盒   兔環0酸腺苷試劑盒   規格型號 ：96T/48T   兔環0酸腺苷試劑盒，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：兔環0酸腺苷試劑盒 、兔環0酸腺苷檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

兔核因子κB受體活化因子配基檢測試劑盒   兔核因子κB受體活化因子配基試劑盒   規格型號 ：96T/48T   兔核因子κB受體活化因子配基試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：兔核因子κB受體活化因子配基試劑盒 、兔核因子κB受體活化因子配基檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

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