老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介
：

兔肾足突分离自肾组织

；肾小球是肾元中的用于将血液过滤生成原尿的一团毛细血丛，被鲍氏囊所包裹
，是尿液形成的重要构造。血液经由入球小动脉进入肾小球
。肾小球内的微血管不像其他微血管
，汇流入静脉

，而是流入出球小动脉。在肾小球内
，微血管受到高压
，而加速了超滤作用（hyperfiltration）的进行
。微血管中的血液经由超滤作用之后
，形成滤液，渗入鲍氏囊内

。肾小球与鲍氏囊合称为肾小体
，肾小球的过滤速率便称为肾小球过滤率。足细胞（podocyte）即肾小囊脏层上皮细胞
，它附着于肾小球基底膜（GBM）的外侧
，连同GBM和毛细血管内皮一起构成了肾小球血液滤过屏障。足细胞特殊的解剖位置
，使得其体内研究较为困难
；又由于正常成年机体的肾脏足细胞是一种终末分化细胞

，体外培养的原代细胞不能增殖
。足细胞呈星型多突状
，胞体较大，由胞体伸出许多突起
，又称足突（FP）

，呈指状交叉复盖于GBM外表面
，并通过黏附分子和蛋白多糖分子与GBM相连
。足细胞在正常情况下可以分泌GBM的主要组成成分
，IV型胶原和纤维连接蛋白（FN）；在促肾纤维化引资等刺激下还能分泌具有降解GBM作用的基质金属蛋白酶（MMPs）和组织蛋白酶，从而在GBM的代谢平衡中发挥重要作用
。足细胞之间邻近的足突相互交替，形成了许多30-40nm的裂孔，孔上覆盖一层厚4-6nm的裂孔隔膜
，即肾小球足突间裂孔隔膜。后者是血浆蛋白通过脉管系统的后屏障
，对于维持肾小球滤过屏障结构与功能完整性发挥关键作用。

方法简介
：

实验室分离的兔肾足突采用机械研磨过不同孔径不锈钢网筛结合胶原酶消化法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔肾足突经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS、生长添加剂


、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性
：可传1-2代

消化液
：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔肾足突体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养

，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液

、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠单酰脱羧酶(MLYCD)检测试剂盒
，英文名
： MLYCD ELISA Kit

Mouse alpha N has amido glucosidase (alpha NAG) ELISA Kit 小鼠αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)检测试剂盒

ELISA 小鼠血管内皮抑素(mouse Endostatin)  进口分装

CLIAKitforKLK10(HumanKallikrein10)ELISAKit人10

通用型大肠杆菌(E.Coli)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20次

ELISAKitTBA大鼠总胆汁酸

IL6ST重组小鼠 IL6ST / gp130 / CD130 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

白介素23(IL23)重组蛋白 Recombinant Interleukin 23 (IL23)

SRFBP1重组人 SRFBP1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

HSF1 Protein Human 重组人 HSF1 / HSTF1 蛋白

CD160 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD160 蛋白 (Fc 标签)

白介素23(IL23)重组蛋白 Recombinant Interleukin 23 (IL23)

HSF1 Protein Human 重组人 HSF1 / HSTF1 蛋白

IL6ST重组小鼠 IL6ST / gp130 / CD130 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CD160 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD160 蛋白 (Fc 标签)

SRFBP1重组人 SRFBP1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠C型尿肽(CNP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat vitamin D2 (VD2) ELISA Kit 大鼠2(VD2)检测试剂盒

HumanInhibin,INH-AELISAKit 人抑制素A(INH-A)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancoloncancer-specificaigen-3,CCSA-3检测试剂盒人大肠癌专一抗原3(CCSA-3)检测试剂盒规格：96T/48T

组织ATP生物发光法定量检测试剂盒50次

Humanpyruvatedehydrogenase-E1,PDHE1ELISAKit人同酸脱氢酶E1(PDHE1)检测试剂盒规格：96T/48T

兔肾足突细胞兔肌钙蛋白Ⅰ检测试剂盒   兔肌钙蛋白Ⅰ试剂盒   规格型号：96T/48T   兔肌钙蛋白Ⅰ试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：兔肌钙蛋白Ⅰ试剂盒、兔肌钙蛋白Ⅰ 检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

兔环0酸腺苷检测试剂盒   兔环0酸腺苷试剂盒   规格型号：96T/48T   兔环0酸腺苷试剂盒，规格型号：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：兔环0酸腺苷试剂盒、兔环0酸腺苷检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

兔核因子κB受体活化因子配基检测试剂盒   兔核因子κB受体活化因子配基试剂盒   规格型号：96T/48T   兔核因子κB受体活化因子配基试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名：兔核因子κB受体活化因子配基试剂盒
、兔核因子κB受体活化因子配基检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

兔过氧化物酶体增殖因子活化受体γ检测试剂盒   兔过氧化物酶体增殖因子活化受体γ试剂盒   规格型号
：96T/48T   兔过氧化物酶体增殖因子活化受体γ试剂盒，规格型号
：96T/48T

，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：兔过氧化物酶体增殖因子活化受体γ试剂盒、兔过氧化物酶体增殖因子活化受体γ 检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。