① 組織塊培養法

組織塊培養是常用 、簡便易行和成功率較高的原代培養方法 。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種於培養瓶(或皿)中 ，瓶壁可預先塗以膠原薄層 ，以利於組織塊粘著於瓶壁 ，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長 。

② 消化培養法

③ 懸浮細胞培養法

對於懸浮生長的細胞 ，如白血病細胞 、淋巴細胞 、骨髓細胞 、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化 ，可采用低速離心分離 ，直接培養 ，或經淋巴細胞分層液分離後接種培養 。

④器官培養

器官培養是指從供體取得器官或組織塊後 ，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養 ，器官培養可保持器官組織的相對完整性 ，可用於重點觀察細胞間的聯係 、排列情況和相互影響 ，以及局部環境的生物調節作用 。

產品名稱 ：兔食管平滑肌細胞

英文名稱 ：Rabbit Esophageal Smooth Muscle Cells

組織來源 ：食管

產品規格 ：5×105cells/T25細胞培養瓶

兔食管平滑肌分離自食管組織 ；食管可分為頸段 、胸段和腹段 ，脊椎動物食管的頸段位於氣管背後和脊柱前端 ，胸段位於左 、右肺之間的縱膈內 ，胸段通過膈孔與腹腔內腹相連 ，腹段很短與胃相連 。哺乳動物的食管結構上由內向外分四層 ：黏膜層 、黏膜下層 、肌層和外膜 。其中 ，肌層上1/3段為骨骼肌 ，下1/3為平滑肌 ，中段為骨骼肌和平滑肌混合組成 。其中 ，肌纖維的排列方式分為內環形和外縱形兩層 。食管的蠕動是由食管平滑肌收縮嚴格控製 ，食管還有括約肌 ，位於環狀軟骨水平的，稱為食管上括約肌 ；位於食管下端 ，一部分在膈上 ，穿過膈孔 ，另一部分在膈下的高壓帶 ，稱為食管下括約肌 。食管平滑肌細胞原代分離培養3天後 ，可見細胞貼壁伸展 ，細胞形態大小不一 ，呈梭形 、不規則形 、三角形或扇形 ，核卵圓形 、居中 ；2周後細胞匯合 ，多數細胞伸展呈長梭形 ，胞漿豐富 ，有分枝狀突起 ，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長 ，高低起伏 ；細胞密度低時 ，常交織成網狀 ；密度高時 ，則排列為旋渦狀或柵欄狀 。傳代後細胞生長較快 ，4-6天即可匯合 ，並保持上述形態學特征和生長特點 。

實驗室分離的兔食管平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔食管平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔食管平滑肌體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

取材→分離→培養和維持

1 、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養成功的首要條件 ，直接影響細胞的體外培養 。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免幹燥

⑤ 應注意組織類型 、分化程度 、年齡等

⑥ 作好記錄

2 、分離

人或動物體內(或胚胎組織)由於多種細胞結合緊密 ，不利於各個細胞在體外培養中生長繁殖 ，必須將現有的組織塊充分散開 ，使細胞解離出來 。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液 、羊水 、胸水或腹水的懸液材料 ，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鍾。經離心後由於各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層 ，這樣可根據需要收獲目的細胞 。

(2)實體組織材料的分離方法

對於實體組織材料 ，由於細胞間結合緊密 ，為了使組織中的細胞充分分散 ，形成細胞懸液 ，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法 。

① 機械分散法

特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大 ，而且細胞分散效果差,適用於處理纖維成分少的軟組織 。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀) ，應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構鬆動 ，使團塊膨鬆 ，由塊狀變成絮狀 ，此時再采用機械法 ，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩 ，使細胞團塊得以較充分的分散，製成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液 ，接種培養後 ，細胞容易貼壁生長 。

小鼠核因子kb（NF-kb）試劑盒   96T/48T

小鼠漢坦病毒（HV）試劑盒   96T/48T

小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)試劑盒   96T/48T

小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)試劑盒   96T/48T

小鼠抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human chemokine (FK) ELISA Kit 人趨化因子(FK)試劑盒

HumanSurfaceMembraneImmunoglobulin,SmIgELISAKit 人細胞膜表麵免疫球蛋白(SmIg)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanalveolibasememembranezoneaibody,ABM-Ab試劑盒人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab)試劑盒規格 ：96T/48T

植物超氧化物陰離子熒光法定量試劑盒20次

MonkeyIerleukin4,IL-4ELISAKit猴白介素4(IL-4)試劑盒規格 ：96T/48T

CD86重組食蟹猴 CD86 / B7-2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

LH(Luteinizing Hormone 0.5mgLH(Luteinizing Hormone) 人促黃體生成素(多肽)

PHPT1重組人 PHPT1 / PHP14 蛋白 Protein

DNAJC30 Protein Human 重組人 DNAJC30 蛋白

NLGN1 Protein Mouse 重組小鼠 Neuroligin 1 / NLGN1 蛋白

LH(Luteinizing Hormone 0.5mgLH(Luteinizing Hormone) 人促黃體生成素(多肽)

DNAJC30 Protein Human 重組人 DNAJC30 蛋白

CD86重組食蟹猴 CD86 / B7-2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

NLGN1 Protein Mouse 重組小鼠 Neuroligin 1 / NLGN1 蛋白

PHPT1重組人 PHPT1 / PHP14 蛋白 Protein

兔食管平滑肌細胞大鼠接觸蛋白3(CN3)試劑盒  ，英文名 ： CN3 ELISA Kit

Mouse neuophil gelatinase associated lipocalin (NGAL) ELISA Kit 小鼠中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)試劑盒

RatThrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFIELISAKit 大鼠纖溶抑製因子/激活的纖溶抑製物(TAFI)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforFishOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGPELISAkit魚骨鈣素/骨穀蛋白

細胞基質金屬蛋白酶(MMP1/8/13)原位明膠酶譜法(insituzymography)熒光染色試劑盒20次

RatOsteoprotegerin,OPGELISAKit大鼠骨保護素(OPG)試劑盒規格 ：96T/48T

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協商後選擇下述方式中的一種進行 。

1)1mL凍存細胞懸液裝於1.8ml的凍存管中,置於裝滿幹冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞後請盡快解凍複蘇細胞進行培養,如無法立刻進行複蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月 。

T-25培養瓶充滿培養基後進行常溫運輸;收到細胞後請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至於培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁 。本公司的所有產品僅用於科學研究或者工業科研等非醫療目的 ，不可用於人類或動物的臨床診斷或治療 ，非藥用 ，非食用