老哥俱乐部

细胞简介

：

兔髂动脉内皮分离自髂动脉组织；髂总动脉位于机体的盆腔，兔的髂总动脉有两条，也就是临床上左右两条分支，它是由腹部主要的动脉演化而来
，由腹部的腹主动脉沿着机体的脊柱方向向下进行，到达第4腰椎后开始分成两支，这就是左右髂总动脉。动脉是介于心室与毛细血管之间的管道，它接近心室的部分，管径大，管壁较厚
。经过反复分支，管径逐渐变小，管壁变薄
，后形成与毛细血管构造相似的毛细血管前小动脉，与毛细血管相接


。动脉的管径大小和管壁的厚薄
，虽相差很大，但构造上均有共同之处。一般均由3层膜组成，内层称为内膜，由内皮及纵行排列的结缔组织构成
；中间的一层称为中膜
，由环形排列的组织构成；外的一层叫外膜，由纵行排列的结缔组织构成

。动脉内皮细胞是覆盖在主动脉内面的单层细胞

，可分泌一系列血管活性物质而保持血管稳态，当其受到炎症或其它因素刺激后稳态被破坏而导致一些心血管疾病的发生
。因此
，动脉内皮细胞已成为研究心血管疾病发病机制及治疗药物的工具。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成
。它形成血管的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至小的微血管。

方法简介：

实验室分离的兔髂动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法
、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔髂动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息
：

包被条件
：PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基
：含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率

：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液

：0.25%

培养条件

：气相
：空气，95%
；CO2
，5%

兔髂动脉内皮体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

大鼠补体蛋白3(C3)检测试剂盒 ，英文名： C3 ELISA Kit

Mouse alpha 1 microglobulin (alpha 1-MG) ELISA Kit 小鼠α1微球蛋白(α1-MG)检测试剂盒

ELISA 小鼠噬酸性粒细胞趋化因子(mouse Eotaxin)  进口分装

CLIAKitforKLR(Humankillercelllectin-likereceptor)ELISAKit人杀伤细胞凝集素样受体

通用型半胱(cysteine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒20次

ELISAKitTPA大鼠组织多肽抗原

CPE重组人 Carboxypeptidase E / CPE 蛋白 (Fc 标签) Protein

内皮素1(EDN1)重组蛋白 Recombinant Endothelin 1 (EDN1)

CCL18重组人 CCL18 / PARC / MIP4 蛋白 Protein

HYOU1 Protein Human 重组人 ORP150 / HYOU1 / HSP12A 蛋白

NP Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) Nucleocapsid / NP

内皮素1(EDN1)重组蛋白 Recombinant Endothelin 1 (EDN1)

HYOU1 Protein Human 重组人 ORP150 / HYOU1 / HSP12A 蛋白

CPE重组人 Carboxypeptidase E / CPE 蛋白 (Fc 标签) Protein

NP Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) Nucleocapsid / NP

CCL18重组人 CCL18 / PARC / MIP4 蛋白 Protein

小鼠apelin 12(AP12)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat iercellular adhesion molecule 3 (ICAM-3/CD50) ELISA Kit 大鼠细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)检测试剂盒

HumanParathyroidHormone-LikeRelatedProtein,PTHrPELISAKit 人甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancomplemeconolprotein,CCP检测试剂盒人补体调节蛋白(CCP)检测试剂盒规格
：96T/48T

组织B-RAF激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

Humanpulmonaryactivatioegulatedchemokine,PARCELISAKit人肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)检测试剂盒规格
：96T/48T

兔髂动脉内皮细胞兔补体蛋白3检测试剂盒   兔补体蛋白3试剂盒   规格型号
：96T/48T   兔补体蛋白3试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：兔补体蛋白3试剂盒
、兔补体蛋白3 检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

兔半胱酸蛋白酶抑制剂检测试剂盒   兔半胱酸蛋白酶抑制剂试剂盒   规格型号：96T/48T   兔半胱酸蛋白酶抑制剂试剂盒，规格型号：96T/48T

，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：兔半胱酸蛋白酶抑制剂试剂盒、兔半胱酸蛋白酶抑制剂检测试剂盒   保存条件

：2-8℃   保质期
：6个月。

兔白细胞介素35检测试剂盒   兔白细胞介素35试剂盒   规格型号：96T/48T   兔白细胞介素35试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：兔白细胞介素35试剂盒、兔白细胞介素35 检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

兔白细胞介素1检测试剂盒   兔白细胞介素1试剂盒   规格型号
：96T/48T   兔白细胞介素1试剂盒
，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：兔白细胞介素1试剂盒、兔白细胞介素1检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。