老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二

、免疫荧光鉴定

：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min


；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次

，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

兔前列腺成纤维分离自前列腺组织；前列腺（Prostate）是雄性的性腺器官
；前列腺是不成对的实质性器宫
，由腺组织和肌组织构成
。前列腺如栗子，底朝上，与膀胱相贴，尖朝下，抵泌尿生殖膈
，前面贴耻骨联合，后面依直肠。前列腺腺体的中间有尿道穿过

，扼守着尿道上口，所以
，前列腺有问题时
，排尿先受影响。前列腺是机体非常少有的，具有内、外双重分泌功能的性分泌腺。作为外分泌腺，前列腺每天分泌前列腺液
，是构成精液主要成分
；作为内分泌腺
，前列腺分泌的激素称为“前列腺素"
。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构
，其细胞核呈规则的卵圆形

，核仁大而明显

。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的前列腺成纤维细胞呈圆形
、折光性良好，悬浮于培养基中
。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态
，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大
，细胞质透明，细胞核较大
，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合
，并彼此连接成网状
；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。

方法简介
：

实验室分离的兔前列腺成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶

。

质量检测

实验室分离的兔前列腺成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1

、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传5代左右；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%

；CO2

，5%

兔前列腺成纤维体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后


，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

兔组织因子途径抑制物(TFPI)试剂盒   96T/48T

兔子组织因子(TF)试剂盒   96T/48T

兔子组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)试剂盒   96T/48T

兔子组织多肽抗原(TPA)试剂盒   96T/48T

小鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human glucocoicoid receptor beta (GR- beta) ELISA Kit 人糖皮质激素受体β(GR-β)试剂盒

HumanApolipoproteinE,Apo-EELISAKit 人载脂蛋白E(Apo-E)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanBladdeumoraigen,BTA试剂盒人膀胱抗原(BTA)试剂盒规格：96T/48T

植物总氨基酸含量荧光定量试剂盒20次

HumansubstancePreceptor,SP-RELISAKit人P物质受体(SP-R)试剂盒规格
：96T/48T

AMY2A重组食蟹猴 AMY2A / Alpha-amylase 蛋白 (Fc 标签) Protein

IL-12(Interleukin-12 0.5mgIL-12(Interleukin-12) 白介素12抗原(白细胞介素-12)

S100A14重组人 S100A14 / S114 蛋白 Protein

FSTL5 Protein Human 重组人 FSTL5 蛋白

IFNB1 Protein Mouse 重组小鼠 IFNB1 / IFN-beta / Interferon beta 蛋白 (Fc 标签)

IL-12(Interleukin-12 0.5mgIL-12(Interleukin-12) 白介素12抗原(白细胞介素-12)

FSTL5 Protein Human 重组人 FSTL5 蛋白

AMY2A重组食蟹猴 AMY2A / Alpha-amylase 蛋白 (Fc 标签) Protein

IFNB1 Protein Mouse 重组小鼠 IFNB1 / IFN-beta / Interferon beta 蛋白 (Fc 标签)

S100A14重组人 S100A14 / S114 蛋白 Protein

兔前列腺成纤维细胞大鼠巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)试剂盒

，英文名
： GM-CSF ELISA Kit

Mouse connective tissue growth factor (CTGF) ELISA Kit 小鼠结缔组织生长因子(CTGF)试剂盒

Mousecalciumchannelblockers,CCBELISAKit 小鼠钙通道阻滞剂(CCB)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanparamyxovirusparotitisIgMELISAKit人腮腺病毒IgM

同位素标记法组织端粒酶活性AP电泳分析试剂盒10次

ELISAKitpACCase大鼠0酸化乙酰羧化酶