實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人小腦顆粒分離自小腦皮層組織 ；神經元是神經係統基本的結構與功能單位 ，小腦顆粒神經元是體積較小的神經元 ，直徑約10μm ，在中樞神經係統中含量非常豐富 ，近乎神經元數量的一半 。由於小腦神經元的生長 、分化和大腦皮層神經元相似 ，而且數量多 、便於取材 ，因此小腦顆粒神經元是研究神經元生長發育 、神經軸突再生及神經疾病發生機製和臨床神經藥理的重要手段 。小腦顆粒神經元是小腦主要的中間神經元 ，在哺乳動物的小腦內數量為豐富 。顆粒神經元的軸突與苔狀纖維和爬行纖維相聯係 ，形成小腦皮層內的神經元環路 ，在小腦的神經活動中起著非常重要的作用 。在動物傳染性海綿狀腦病中 ，病變可波及小腦顆粒神經元 ，導致小腦皮層的神經元環路受損 ，從而呈現神經性行為失調 。研究小腦顆粒神經元在動物傳染性海綿狀腦病病理學變化中的反應 、病理發生的機理特別是分子機理 ，有賴於小腦顆粒神經元細胞模型的建立 。小腦顆粒細胞的軸突是沿冠狀軸分布的平行纖維 ，正是這種排列保證了興奮的單向傳導 ，這是小腦功能理論中的關鍵假設 ，小腦顆粒細胞通過g-氨基丁酸接受戈爾吉細胞的抑製性突觸的信息傳入 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人小腦顆粒采用消化法結合神經元專用培養基 、化學試劑抑製法篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人小腦顆粒經β-Tubulin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含B-27 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 神經元細胞樣

傳代特性 屬於終末分化細胞 ；屬於不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠腦啡肽酶(NEP)檢測試劑盒  ，英文名 ： NEP ELISA Kit

Monkey insulin (INS) ELISA Kit 猴胰島素(INS)檢測試劑盒

Ratlipoproteinlipase,LPLELISAKit 大鼠脂蛋白脂酶(LPL)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGHRP-GhrelinELISAKit大鼠生長激素釋放肽ghrelin

細胞輔脂酶(COLIPASE)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Ratsolubleplateletendothelialcelladhesionmolecule1,sPECAM-1ELISAKit大鼠可溶性血小板內皮細胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

ERBB3重組大鼠 HER3 / ErbB3 蛋白 Protein

GDF8/MSTN(growth differntiation factor 8 0.1mgGDF8/MSTN(growth differntiation factor 8) 重組生長分化因子8/肌肉抑製素

MUC1重組人 Mucin-1 / MUC-1 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽) Protein

IgG3 Protein Human 重組人 IgG3-Fc / IGHG3 蛋白

SERPINA10 Protein Mouse 重組小鼠 SerpinA10 / ZPI 蛋白

GDF8/MSTN(growth differntiation factor 8 0.1mgGDF8/MSTN(growth differntiation factor 8) 重組生長分化因子8/肌肉抑製素

IgG3 Protein Human 重組人 IgG3-Fc / IGHG3 蛋白

ERBB3重組大鼠 HER3 / ErbB3 蛋白 Protein

SERPINA10 Protein Mouse 重組小鼠 SerpinA10 / ZPI 蛋白

MUC1重組人 Mucin-1 / MUC-1 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽) Protein

豚鼠(NO)檢測試劑盒  ，英文名 ： NO ELISA Kit

Human protein phosphatase (PP) ELISA Kit 人蛋酸酶(PP)檢測試劑盒

Monkeyendotoxin,ETELISAKit內毒素(ET)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBMP-2(MouseBonemorphogeneticprotein2)ELISAKit小鼠骨成型蛋白2

細菌膜性囊泡(RSOV和IOV)製備試劑盒20次

Rabbitmaixmetalloproteinase3,MMP-3ELISAKit兔子基質金屬蛋白酶3(MMP-3)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人小腦顆粒細胞鼠疫杆菌(YP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

鼠疫杆菌(YP)核酸檢測試劑盒   48T

腦膜奈瑟菌通用型(NM-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

腦膜奈瑟菌通用型(NM-U)核酸檢測試劑盒   48T