老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

人小脑颗粒分离自小脑皮层组织

；神经元是神经系统基本的结构与功能单位
，小脑颗粒神经元是体积较小的神经元，直径约10μm，在中枢神经系统中含量非常丰富
，近乎神经元数量的一半
。由于小脑神经元的生长、分化和大脑皮层神经元相似
，而且数量多、便于取材，因此小脑颗粒神经元是研究神经元生长发育、神经轴突再生及神经疾病发生机制和临床神经药理的重要手段。小脑颗粒神经元是小脑主要的中间神经元，在哺乳动物的小脑内数量为丰富。颗粒神经元的轴突与苔状纤维和爬行纤维相联系，形成小脑皮层内的神经元环路，在小脑的神经活动中起着非常重要的作用
。在动物传染性海绵状脑病中
，病变可波及小脑颗粒神经元
，导致小脑皮层的神经元环路受损
，从而呈现神经性行为失调。研究小脑颗粒神经元在动物传染性海绵状脑病病理学变化中的反应、病理发生的机理特别是分子机理
，有赖于小脑颗粒神经元细胞模型的建立。小脑颗粒细胞的轴突是沿冠状轴分布的平行纤维，正是这种排列保证了兴奋的单向传导，这是小脑功能理论中的关键假设，小脑颗粒细胞通过g-氨基丁酸接受戈尔吉细胞的抑制性突触的信息传入
。

方法简介
：

公司实验室分离的人小脑颗粒采用消化法结合神经元专用培养基、化学试剂抑制法筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人小脑颗粒经β-Tubulin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含B-27、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 神经元细胞样

传代特性 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品

：

大鼠脑啡肽酶(NEP)检测试剂盒 
，英文名

： NEP ELISA Kit

Monkey insulin (INS) ELISA Kit 猴胰岛素(INS)检测试剂盒

Ratlipoproteinlipase,LPLELISAKit 大鼠脂蛋白脂酶(LPL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGHRP-GhrelinELISAKit大鼠生长激素释放肽ghrelin

细胞辅脂酶(COLIPASE)活性比色法定量检测试剂盒20次

Ratsolubleplateletendothelialcelladhesionmolecule1,sPECAM-1ELISAKit大鼠可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)检测试剂盒规格
：96T/48T

ERBB3重组大鼠 HER3 / ErbB3 蛋白 Protein

GDF8/MSTN(growth differntiation factor 8 0.1mgGDF8/MSTN(growth differntiation factor 8) 重组生长分化因子8/肌肉抑制素

MUC1重组人 Mucin-1 / MUC-1 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签) Protein

IgG3 Protein Human 重组人 IgG3-Fc / IGHG3 蛋白

SERPINA10 Protein Mouse 重组小鼠 SerpinA10 / ZPI 蛋白

GDF8/MSTN(growth differntiation factor 8 0.1mgGDF8/MSTN(growth differntiation factor 8) 重组生长分化因子8/肌肉抑制素

IgG3 Protein Human 重组人 IgG3-Fc / IGHG3 蛋白

ERBB3重组大鼠 HER3 / ErbB3 蛋白 Protein

SERPINA10 Protein Mouse 重组小鼠 SerpinA10 / ZPI 蛋白

MUC1重组人 Mucin-1 / MUC-1 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签) Protein

豚鼠(NO)检测试剂盒 ，英文名
： NO ELISA Kit

Human protein phosphatase (PP) ELISA Kit 人蛋酸酶(PP)检测试剂盒

Monkeyendotoxin,ETELISAKit内毒素(ET)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBMP-2(MouseBonemorphogeneticprotein2)ELISAKit小鼠骨成型蛋白2

细菌膜性囊泡(RSOV和IOV)制备试剂盒20次

Rabbitmaixmetalloproteinase3,MMP-3ELISAKit兔子基质金属蛋白酶3(MMP-3)检测试剂盒规格
：96T/48T

人小脑颗粒细胞鼠疫杆菌(YP)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

鼠疫杆菌(YP)核酸检测试剂盒   48T

脑膜奈瑟菌通用型(NM-U)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

脑膜奈瑟菌通用型(NM-U)核酸检测试剂盒   48T