細胞簡介 ：

人小梁網分離自眼球組織 ；小梁網由角膜基質纖維 、後界膜和角膜內皮向後擴展而成 ，覆蓋在鞏膜靜脈竇的內側 。小梁網細胞在眼內壓調節中起著關鍵作用；小梁網細胞內有特定的神經遞質和神經肽受體 ，其中包括腎上腺素 、乙酰和神經肽Y 。青光眼是由於眼內壓力升高而造成的一種不可逆致盲眼病 ，小梁網細胞的體外培養是青光眼病因學研究的重要手段之一 。在小梁網細胞中 ，一長串的血管活性多肽和生長因子能夠觸發細胞內信號傳導機製 ，小梁網細胞可合成不同類型的細胞外基質蛋白以及金屬蛋白酶 。形態學觀察可見 ，剛從組織塊長出的原代細胞 ，形態各異 ，多數呈星狀或不規則形 。細胞有胞突 ，核橢圓形 ，胞體肥大 ，胞漿豐富 ，且可見吞噬顆粒 。隨著細胞的增生及相互融合為單層 ，細胞的形態趨於一致 。胞漿的色素顆粒及胞突消失 ，排列緊密呈類似上皮細胞的扁橢圓形或不規則形 。胞體透亮 ，包膜清晰 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人小梁網采用組織貼塊法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的人小梁網經NSE（神經元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠內皮細胞TEK酪酸激酶(Tie2)檢測試劑盒  ，英文名 ： Tie2 ELISA Kit

Monkey high sensitive C reactive protein (hs-CRP) ELISA Kit 猴超敏C反應蛋白(hs-CRP)檢測試劑盒

Ratcatecholamine,CAELISAKit 大鼠兒茶酚胺(CA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGLP-1(human)人胰高血糖素樣肽1

細胞馮庫薩(VONKOSSA)鈣染色試劑盒50次

RatsolubleVascuolarcelladhesionmolecule1,sVCAM-1ELISAKit大鼠可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

TNFRSF1A重組大鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 Protein

DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase 0.5mgDRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase)N terminal 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗原(N端)

LOXL2重組人 LOXL2 / Lysyl oxidase homolog 2 蛋白 Protein

IgG4 Protein Human 重組人 IgG4-Fc 蛋白 (108 Ser/Pro)

CTSA Protein Mouse 重組小鼠 Cathepsin A / CTSA 蛋白

DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase 0.5mgDRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase)N terminal 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗原(N端)

IgG4 Protein Human 重組人 IgG4-Fc 蛋白 (108 Ser/Pro)

TNFRSF1A重組大鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 Protein

CTSA Protein Mouse 重組小鼠 Cathepsin A / CTSA 蛋白

LOXL2重組人 LOXL2 / Lysyl oxidase homolog 2 蛋白 Protein

豚鼠血清總補體(CH50)檢測試劑盒  ，英文名 ： CH50 ELISA Kit

Human proteinase 3 aibody (PR3Ab) ELISA Kit 人蛋白酶3抗體(PR3Ab)檢測試劑盒

MonkeyHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBMP-2(HumanBonemorphogeneticprotein2)ELISAKit人骨成型蛋白2

細菌內毒素比色法定量檢測試劑盒20次

Rabbitmaixmetalloproteinase2/GelatinaseA,MMP-2ELISAKit兔基質金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人小梁網細胞噬酸性粒細胞趨化因子 -2(Eotaxin-2)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

促紅細胞生成素 (EPO)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

促紅細胞生成素受體 ( EPO Receipter)   作用：   ELISA   規格 ：      進口分裝

可溶性血管內皮細胞蛋白 C 受體 (sEPCR)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。