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斑點氣單胞菌PCR檢測試劑盒對照反應
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:761 更新時間
:2020-05-21
PCR完成後 ,建議將反應液於1000× g (大約4000 rpm) 離心1~3 min以沉澱血細胞碎片 ,之後取上清進行下遊分析 。該步驟可有效去除多種血液組分 。當使用高濃度血液模板時此步尤為重要 ,因為經過PCR循環 ,反應管中會存在大量的血細胞碎片 。這些碎片會幹擾下遊的檢測 ,如瓊脂糖電泳檢測 。注意 :由於血液本身的原因 ,PCR 結束後在 PCR 管的底部會出現透明凝膠狀物質 ,此為正常現象 。
對照反應
在PCR結果分析時 ,不管是陽性結果或陰性結果 ,如果沒有對照反應 ,都不能確定結果是否可靠 。為了便於後續實驗結果的分析 ,建議在進行PCR時 ,設置陽性和陰性PCR對照反應以便於排除假陽性或假陰性的幹擾 。
a)模板DNA :選用樣本純化的DNA 。
b)引物的選擇 :建議選擇該樣本較易擴增的基因的引物 ,如 β-actin 基因或 GAPDH 等 。
4.2 陰性對照
PCR反應體係被汙染會導致PCR結果出現假陽性 ,需要設置陰性對照來排除 。將使用的移液器槍頭浸泡在2× Blood Master Mix中 ,添加引物 ,ddH2O進行PCR擴增 ;另取ddH2O作為模板 ,用目的基因引物進行PCR擴增,以排除PCR體係是否被汙染和實驗是否有其他汙染源 。
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