為了更好的使用elisa試劑盒 ，接下來為大家說一下elisa試劑盒的提純方法 ，希望以下介紹對大家有所幫助 。
IL-3 雞白介素3酶聯免疫試劑盒分光光度法 注意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定 。 試劑一 ：液體×1瓶 ，4℃保存 。 試劑二 ：粉劑×1瓶 ，4℃保存 。臨用前加10mL蒸餾水溶解 。 試劑三：粉劑×1瓶 ，4℃避光保存 。臨用前加入10mL試劑一 ，沸水溶解 。試劑四 ：粉劑×1瓶 ，4℃保存 。臨用前加50mL蒸餾水溶解 。試劑五 ：液體×1瓶 ，4℃保存 。 標準品 ：液體×1支 ，0.25μmol/mL標準酪an酸溶液 ，4℃保存 。自備儀器和用品 ： 可見分光光度計 、水浴鍋 、磁力攪拌器 、可調式移液槍 、1mL玻璃比色皿 、1.5mLEP管和蒸餾水 。產品說明 ： NP在一定的溫度和中性pH條件下 ，催化水解蛋白質 。由於其安全無毒 、水解能力強 、作用範圍廣等特點 ，中性蛋bai酶常用於食品 、飼料 、化妝品和營養保健品 。 中性條件下 ，NP催化酪蛋白水解產生酪an酸 ；在堿性條件下 ，酪an酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍 ；在680nm有特征吸收峰 。
操作過程 ：
一 、粗酶液提取 ：
1.組織 ：按照組織質量（g） ：試劑一體積(mL)為1 ：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織 ，加入1mL試劑一）冰浴勻漿 ，8000g ，4℃離心10min ，取上清 ，即粗酶液 。2.血清或培養液 ：直接測定 。 3.細菌 、真菌 ：按照細胞數量（104個） ：試劑一體積（mL）為500~1000 ：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一） ，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w ，超聲3秒 ，間隔7秒 ，總時間3min） ；然後8000g ，4℃ ，離心10min，取上清置於冰上待測 。
二 、測定操作 ： 1.分光光度計預熱30min ，調節波長到680nm ，蒸餾水調零 。2.試劑二 、試劑三和試劑四置於30℃水浴保溫30min 。 3.對照管 ：取一支EP管 ，加入100μL粗酶液 ，200μL試劑二 ，混勻後置於30℃水浴保溫10min ；加入200μL試劑三 ，混勻後8000g ，4℃離心10min ；取200μL上清液 ，加入新的EP管 ，再加入1000μL試劑四 ，200μL試劑五 ，混勻後置於30℃水浴保溫20min ，於680nm測定光吸收 ，記為A對照管 。 4.測定管 ：取一支EP管 ，加入100μL粗酶液 ，200μL試劑三 ，混勻後置於30℃水浴保溫10min ；加入200μL試劑二 ，混勻後8000g ，4℃離心10min ；取200μL上清液 ，加入新的EP管 ，再加入1000μL試劑四 ，200μL試劑五 ，混勻後置於30℃水浴保溫20min ，於680nm測定光吸收，記為A測定管 。（注意與空白管不同 ，先加試劑三 ，後加試劑二） 5.空白管 ：取EP管 ，加入200μL蒸餾水 ，1000μL試劑四 ，200μL試劑五 ，混勻後置於30℃水浴保溫20min ，於680nm測定光吸收 ，記為A空白管 。 6.標準管 ：取EP管 ，加入200μL標準品 ，1000μL試劑四 ，200μL試劑五，混勻後置於30℃水浴保溫20min，於680nm測定光吸收 ，記為A標準管 。注意 ：空白管和標準管隻需要測定一次 。
NP酶活性計算 ：
（1）按蛋白濃度計算 NP活性單位（U）定義 ：30℃每毫克蛋白每分鍾水解產生1μmol酪an酸為一個酶活單位 。NP活性（U/mgprot）=C標準品×△A測定÷△A標準×V1÷（Cpr×V2）÷T =0.125×△A測定÷△A標準÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算 NP活性單位（U）定義 ：30℃每克樣品每分鍾催化水解產生1μmol酪an酸為一個酶活單位 。NP活性（U/g鮮重）=C標準品×△A測定÷△A標準×V1÷（W×V2÷V3）÷T =0.125×△A測定÷△A標準÷WC標準品 ：標準酪an酸溶液濃度 ，0.25μmol/mL ；Cpr ：粗酶液蛋白質濃度 ，mg/mL ；W ：樣品鮮重 ，g ； V1 ：酶促反應總體積 ，0.1mL ；V2 ：加入反應體係中粗酶液體積 ，20µL=2×10-2mL ；V3 ：粗酶液總體積 ，1mL ； T ：催化反應時間，10min 。 注意 ：若反應較弱 ，（A測定管－A對照管）差值較小 ，可適當延長反應時間（20-30min） ，即第一步水浴時間 ，最後計算酶活時對公式進行修改 。