老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小

；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5

、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠子宫颈上皮分离自子宫颈组织；子宫颈位于子宫下部，近似圆锥体，上端与子宫体相连，下端深入阴道
。阴道顶端的穹隆又将子宫颈分为两部分
：宫颈突入阴道的部分称宫颈阴道部，在阴道穹隆以上的部分称宫颈阴道上部
。宫颈的中央为前后略扁的长梭性管腔
，其上端通过宫颈内口与子宫腔相连，其下端通过宫颈外口开口于阴道。内外口之间即宫颈管。宫颈的大小与宫体比例随年龄及内分泌状态等而变化；宫颈壁由黏膜、肌层和外膜组成
。子宫颈可有多种疾病，包括胚胎发育异常
、炎症、瘤样病变、良性肿瘤、恶性肿瘤
、损伤、宫颈性不孕
、辅助生育技术、宫颈与性
、宫颈妊娠等许多问题，体外培养的子宫颈上皮细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠子宫颈上皮采用胶原酶消化法，结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠子宫颈上皮经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品

：

大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP4)检测试剂盒 ，英文名
： IGFBP4 ELISA Kit

Mouse endothelial lipase (EL) ELISA Kit 小鼠内皮脂肪酶(EL)检测试剂盒

MouseVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAkit 小鼠血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanCyclin-D1ELISAKit人细胞周期素D1

细胞AURORA-C激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitBMPs大鼠骨形成蛋白

ACP5重组人 ACP5 / TRAP 蛋白 Protein

序列相似家族5成员C(FAM5C)重组蛋白 Recombinant Family With Sequence Similarity 5, Member C (FAM5C)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

FGFR2 Protein Human 重组人 FGFR2 / CD332 蛋白

Spike Protein MERS-CoV 中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein (ECD, aa 1-1297, His 标签)

序列相似家族5成员C(FAM5C)重组蛋白 Recombinant Family With Sequence Similarity 5, Member C (FAM5C)

FGFR2 Protein Human 重组人 FGFR2 / CD332 蛋白

ACP5重组人 ACP5 / TRAP 蛋白 Protein

Spike Protein MERS-CoV 中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein (ECD, aa 1-1297, His 标签)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

小鼠(CH)Elisa 试剂盒 96T/48T

Human placea growth factor (PLGF) ELISA Kit 人胎盘生长因子(PLGF)检测试剂盒

Humanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit 人纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanBcellactivationfactorrfromthetumornecrosisfactorfamilyreceptor,BAFF-R检测试剂盒人B细胞活化因子受体(BAFF-R)检测试剂盒规格：96T/48T

植物源性饲料油菜(canola)试剂盒20次

Humahrombieceptor,ELISAKit人受体()检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠子宫颈上皮细胞脱脂奶粉   100g

Skimmilk   500g

超氧化物歧化酶   30KU

SOD   3KU