老哥俱乐部

细胞简介

：

小鼠子宫成纤维分离自子宫组织；子宫是孕育胎儿的器官，位于盆腔中部
，膀胱与直肠之间，其位置可随膀胱与直肠的充盈程度或体位而有变化

。子宫的正常位置主要依靠子宫诸韧带、盆膈、尿生殖膈及会阴中心腱等结构维持
，这些结构受损或松弛时，可以引起子宫脱垂
。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
；成纤维细胞较大
，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的子宫成纤维细胞呈圆形
、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰
，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速
，5-7天即呈融合状态
，细胞排列紧密
，有的交叉重叠生长，平坦
、胞体较大
，细胞质透明
，细胞核较大
，呈椭圆形
，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。子宫成纤维细胞的主要特征：①是子宫的重要细胞组成，在体外易于培养；②在子宫损伤后能修复和重塑子宫；③在子宫炎症时能有效控制炎症扩散


。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠子宫成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠子宫成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气
，95%

；CO2，5%

实验报告

：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

土壤纤维素酶（S-CL）试剂盒   可见分光光度法    50管/24样

土壤酸性0酸酶（S-ACP）试剂盒   可见分光光度法   50管/48样

土壤中性0酸酶（S-NP）试剂盒   可见分光光度法   50管/48样

土壤碱性0酸酶（S-AKP/ALP）试剂盒   可见分光光度法   50管/48样

小鼠4羟基壬烯酸(4-HNE)试剂盒 96T/48T

Rat cyclin D1 (Cyclin-D1) ELISA Kit 大鼠细胞周期素D1(Cyclin-D1)试剂盒

Humanglucocoicoidreceptor-α,GR-αELISAKit 人糖皮质激素受体α(GR-α)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanComplemefragme4b,C4b试剂盒人补体片断4b(C4b)试剂盒规格：96T/48T

组织CDK2/CYCLINA激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

HumanProteoglycan,PGELISAKit人蛋白聚糖(PG)试剂盒规格：96T/48T

ANPEP重组小鼠 ANPEP / APN / CD13 蛋白 Protein

CK8(Cytokeratin 8 0.5mgCK8(Cytokeratin 8) 细胞角蛋白8(多肽)

TERF1重组人 TERF1 / TRF1 蛋白 Protein

IFNA10 Protein Human 重组人 Interferon alpha 10 / IFNA10 蛋白 (Fc 标签)

SFTPD Protein Mouse 重组小鼠 SFTPD / SP-D / SFTP4 蛋白

CK8(Cytokeratin 8 0.5mgCK8(Cytokeratin 8) 细胞角蛋白8(多肽)

IFNA10 Protein Human 重组人 Interferon alpha 10 / IFNA10 蛋白 (Fc 标签)

ANPEP重组小鼠 ANPEP / APN / CD13 蛋白 Protein

SFTPD Protein Mouse 重组小鼠 SFTPD / SP-D / SFTP4 蛋白

TERF1重组人 TERF1 / TRF1 蛋白 Protein

小鼠子宫成纤维细胞大鼠成纤维细胞生长因子9(FGF9)试剂盒 ，英文名： FGF9 ELISA Kit

Mouse 8 ISO prostaglandin (8-iso-PG) ELISA Kit 小鼠8异前列腺素(8-iso-PG)试剂盒

ELISA 小鼠sCD40配体(mouse sCD40 Ligand)  进口分装

CLIAKitforLEP(HumanLeptin)ELISAkit人瘦素

通用型HRP-DAB底物显色试剂盒10次

ELISAKitLTC4白三烯C4

注意事项
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1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。