老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠直肠平滑肌分离自直肠组织；直肠为大肠的未段
，位于小骨盆内
。上端平第3骶椎处接续乙状结肠，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿过盆膈，下端以门而终。直肠上端的大小似结肠，其下端扩大成直肠壶腹，是粪便排出前的暂存部位，下端变细接管
。直肠在盆腔内的位置与骶椎腹面关系密切，与骶椎有相同的曲度。直肠周围多脂肪、无纵带，位于膀胱和生殖器官的背侧

。直肠平滑肌细胞原代分离培养3天后

，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一
，呈梭形
、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合
，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起
，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏
；细胞密度低时
，常交织成网状

；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状
。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。直肠的动脉血供主要是来自肠系膜下动脉的直肠上动脉

，来自髂内动脉的直肠中动脉和来自髂内动脉的直肠下动脉。平滑肌收缩是胃肠蠕动中基本的运动方式
；肠炎时由于平滑肌特殊肌动蛋白的增加导致了平滑肌层的增厚。平滑肌肌动蛋白可能影响收缩力的产生，这进一步证明了炎症时的肠平滑肌细胞具有可塑性
。利用肠平滑肌细胞的培养，可以帮助了解收缩、增殖和胃肠道结缔组织对平滑肌细胞的反应。

方法简介

：

公司实验室分离的小鼠直肠平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠直肠平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体
、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin

、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担


。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP5)检测试剂盒 ，英文名： IGFBP5 ELISA Kit

Mouse endostatin (ES) ELISA Kit 小鼠内皮抑素(ES)检测试剂盒

MouseThrombopoietin,TPOELISAkit 小鼠血小板生成素(TPO)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanCyclin-D2ELISAKit人细胞周期素D2

细胞AURORA-B激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitBMP-6大鼠骨形成蛋白6

CNTNAP2重组小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白 Protein

ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide 0.5mgATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide) ATP酶通道蛋白抗原

ENPP2重组人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白 Protein

FGFR4 Protein Human 重组人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白

IL25 Protein Rat 重组大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 标签)

ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide 0.5mgATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide) ATP酶通道蛋白抗原

FGFR4 Protein Human 重组人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白

CNTNAP2重组小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白 Protein

IL25 Protein Rat 重组大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 标签)

ENPP2重组人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白 Protein

小鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human peptidylprolyl CIS ans isomerase (PPI) ELISA Kit 人肽基脯氨酰顺反异构酶(PPI)检测试剂盒

HumanvonWillebrandFactor,vWFELISAKit 人血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanBcelldifferetiationfactor,BCDF检测试剂盒人B细胞分化因子(BCDF)检测试剂盒规格：96T/48T

植物源性饲料油菜籽(rapeseed)试剂盒20次

Humahrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFIELISAKit人纤溶抑制因子/激活的纤溶抑制物(TAFI)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠直肠平滑肌细胞脱氧核糖核酸酶I   100mg

DNaseI,frombovinepancreas

三0酸脱氧核苷酸混合溶液   10x0.5ml

dPMix,10mMeach(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)   100x0.5ml