老哥俱乐部

细胞简介
：

小鼠直肠黏膜上皮分离自直肠组织
；直肠为大肠的未段

，位于小骨盆内
。上端平第3骶椎处接续乙状结肠，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿过盆膈

，下端以门而终
。直肠上端的大小似结肠
，其下端扩大成直肠壶腹，是粪便排出前的暂存部位
，下端变细接管
。直肠在盆腔内的位置与骶椎腹面关系密切
，与骶椎有相同的曲度
。直肠周围多脂肪、无纵带，位于膀胱和生殖器官的背侧。直肠的动脉血供主要是来自肠系膜下动脉的直肠上动脉，来自髂内动脉的直肠中动脉和来自髂内动脉的直肠下动脉。肠黏膜上皮细胞是机体内外环境的重要屏障，持续暴露于大量抗原中，也是机体面对病原微生物的道防线
。因此
，肠黏膜上皮细胞除有吸收
、分泌和转运等重要生理功能之外，在黏膜先天性和获得性免疫防御机制中也起着重要作用
。肠黏膜上皮细胞作为先接触抗原的细胞，在黏膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用，它决定黏膜免疫反应的发生、性质和强度
。

方法简介：

实验室分离的小鼠直肠黏膜上皮采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠直肠黏膜上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV

、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS
、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性
：可传1-2代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%
；CO2
，5%

小鼠直肠黏膜上皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠胰腺再生蛋白Ⅳ(REG4)检测试剂盒 ，英文名： REG4 ELISA Kit

Mouse endocrine gland vascular endothelial growth factor (EG-VEGF) ELISA Kit 小鼠内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)检测试剂盒

MouseTumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISAKIT 小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumancytovillin/ezrin,CVLELISAKit人细胞绒毛蛋白/埃兹蛋白

细胞ARG/ABL2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitC4a大鼠过敏毒素/补体片断4a

BLMH重组小鼠 BLMH / Bleomycin Hydrolase 蛋白 Protein

AEG-1 peptide AEG-1抗原 0.5mgAEG-1 peptide AEG-1抗原

FCGR2B重组人 CD32b / FCGR2B 蛋白 Protein

FH Protein Human 重组人 Fumarate Hydratase / FH 蛋白

CHODL Protein Rat 重组大鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白 (Fc 标签)

补体成分4a(C4a)重组蛋白 Recombinant Complement Component 4a (C4a)

FH Protein Human 重组人 Fumarate Hydratase / FH 蛋白

ART4重组小鼠 ART4 / CD297 蛋白 Protein

TEK Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 Tie2 / TEK 蛋白 (Fc 标签)

COX5B重组人 COX5B 蛋白 Protein

小鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat coagulation factor III (F III) ELISA Kit 大鼠Ⅲ(FⅢ)检测试剂盒

Humanlipoproteinα,Lp-αELISAKit 人脂蛋白α(Lp-α)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanBcellgrowthprotein,BCGF检测试剂盒人B细胞生长因子(BCGF)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物源性饲料玉米试剂盒20次

Humahioredoxin,xELISAKit人硫氧化还原蛋白(x)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠直肠黏膜上皮细胞脱氧胆酸   10g

DeoxycholicAcid,SodiumSalt   50g

焦碳酸二乙脂   10ml

DEPC   100ml

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。