實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠胰腺星狀分離自胰腺組織 ；胰腺分為外分泌腺和內分泌腺兩部分 。外分泌腺由腺泡和腺管組成 ，腺泡分泌胰液 ，腺管是胰液排出的通道 。胰液中含有 、原 、脂肪酶 、等 。胰液通過胰腺管排入十二指腸 ，有消化蛋白質 、脂肪和糖的作用 。內分泌腺由大小不同的細胞團──胰島所組成 ，胰島主要由4種細胞組成 ：α細胞 、β細胞 、γ細胞及PP細胞 。α細胞分泌胰高血糖素 ，升高血糖 ；β細胞分泌胰島素 ，降低血糖 ；γ細胞分泌 ，以旁分泌的方式抑製α 、β細胞的分泌 ；PP細胞分泌胰多肽 ，抑製胃腸運動 、胰液分泌和膽囊收縮 。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征 ，活化的胰腺星狀細胞（PSC）是胰腺纖維化的主要效應細胞 ，PSC分離和成功培養是體外研究胰腺纖維化的重要前提 。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴 ，並表達Desmin蛋白 ，活化後的PSC則表達α-平滑肌肌動蛋白（alpha-SMA） 。PSC具有靜息態與激活態兩種 ，並分別具有特異的標誌物 。靜息狀態PSC胞質內富含的脂滴可以被油紅O染成紅色 ，陽性表達Desmin 。激活狀態PSC陽性表達alpha-SMA 。油紅O染色發現 ，原代分離的細胞培養6d ，胞漿中仍可見明顯的脂滴 ，傳代後 ，橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失 。免疫細胞化學染色顯示 ，細胞接種24h仍然表達Desmin ，48h後Desmin基本不再表達 。培養48h後絕大多數細胞開始表達alpha-SMA ，隨著培養時間的增長和傳代次數的增加 ，細胞表達alpha-SMA ，而不再表達Desmin ，說明細胞活化 。提示PSC接種24h後即啟動了激活過程 ，至培養第6d大多數細胞激活 ，傳代後細胞處於高度激活狀態 。原代胰腺星狀細胞可作為慢性胰腺炎新藥的細胞篩選模型 ，目前研究發現 ：胰腺受損時 ，在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細胞活化 ，導致細胞形態 、功能發生變化 ，促使基質增生 、膠原蛋白的大量生成及不規則沉積 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠胰腺星狀采用膠原酶製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠胰腺星狀經α-SMA 、Desmin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3-5代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代 。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

天青B   1g

AzureB   5g

   50KU

Baciacin   250KU

小鼠1,4,5-三0酸肌醇(IP3)試劑盒 96T/48T

Rat cardioophin 1 (CT-1) ELISA Kit 大鼠心肌營養素1(CT-1)試劑盒

Humaeversei-iodothyronine,3ELISAKit 人反三甲狀腺原(3)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanC-Polypeptide,CP試劑盒人C多肽(CP)試劑盒規格 ：96T/48T

組織CSF1R激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumanProteinCELISAKit人蛋白C(ProteinC)試劑盒規格 ：96T/48T

GHR重組大鼠 Growth Hormone Receptor / GHR / GHBP 蛋白 Protein

HLA-DR(human leukoyte Antigen DR 0.5mgHLA-DR(human leukoyte Antigen DR) HLA-DR抗原

TFRC重組人 Transferrin Receptor / TFRC / CD71 蛋白 Protein

IFNB1 Protein Human 重組人 Interferon beta / IFN-beta / IFNB 蛋白

IL10RB Protein Mouse 重組小鼠 IL10RB / IL10R2 蛋白 (Fc 標簽)

HLA-DR(human leukoyte Antigen DR 0.5mgHLA-DR(human leukoyte Antigen DR) HLA-DR抗原

IFNB1 Protein Human 重組人 Interferon beta / IFN-beta / IFNB 蛋白

GHR重組大鼠 Growth Hormone Receptor / GHR / GHBP 蛋白 Protein

IL10RB Protein Mouse 重組小鼠 IL10RB / IL10R2 蛋白 (Fc 標簽)

TFRC重組人 Transferrin Receptor / TFRC / CD71 蛋白 Protein

小鼠胰腺星狀細胞大鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)試劑盒  ，英文名 ： CRH ELISA Kit

Mouse 17 hydroxycoicosteroid (17-OHCS) ELISA Kit 小鼠17羥皮質類固醇(17-OHCS)試劑盒

ELISA 小鼠腦肽(mouse BNP)  進口分裝

CLIAKitforLIFELISAKit大鼠白血病抑製因子

通用型HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定量PCR擴增試劑盒20次

ELISAKitAflatoxin黴毒素