老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化

；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min

；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

小鼠心脏纤维原分离自心脏组织；心脏由心肌细胞和非心肌细胞组成
，非心肌细胞占细胞总数的70%，其中90%以上的非心肌细胞由心肌成纤维细胞组成。纤维细胞是机能不活跃的成纤维细胞。胞体呈梭形
，胞质较少，弱嗜酸性，胞核小，染色深。电镜下可见，细胞中粗面内质网和高尔基体均不发达
。当组织受损时，纤维细胞可转化为成纤维细胞而参与修复过程。纤维细胞和成纤维细胞是处于不同功能状态的同一种细胞
，如在组织损伤后的修复过程中，纤维细胞可转化为功能活跃的成纤维细胞
。纤维细胞较小，呈多角形，胞质较少，弱嗜酸性，胞核亦较小
，染色较深
，电镜下粗面内质网较少
，高尔基复合体不发达。成纤维细胞较大，呈星形或梭形，有突起，细胞核呈卵圆形
，染色质稀疏，染色淡，核仁明显，胞质较多
。成纤维细胞能合成和分泌胶原蛋白
、弹性蛋白和蛋白多糖，形成胶原纤维、弹性纤维和网状纤维以及基质成分。心肌成纤维细胞主要功能为对心肌细胞起结构支持作用并负责细胞基质外的合成
，当心肌损伤时能产生旁分泌生长因子
。心肌成纤维细胞是心脏结缔组织中常见的细胞
，可合成和分泌胶原纤维、弹性纤维、网状纤维及有机基质，并且在外伤等因素刺激下，部分纤维细胞可重新转变为幼稚的成纤维细胞
，其功能活动也得以恢复，参与组织损伤后的修复。因此，对心肌成纤维细胞的生理学研究成为现代心血管领域研究的一个重点。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠心脏纤维原采用胶原酶消化法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠心脏纤维原经Vimentin免疫荧光鉴定

，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等


。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决


。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

大鼠细胞色素P450氧化还原酶(CPR)检测试剂盒 ，英文名

： CPR ELISA Kit

Mouse neuron specific enolase (NSE) ELISA Kit 小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)检测试剂盒

Mouseapoprotein,apo-A1ELISAKit 小鼠载脂蛋白A1(apo-A1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHSP-90(HumanHeatShockProtein90)ELISAKit人热休克蛋白90

细胞JNK2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-2sRα大鼠白介素2可溶性受体α链

PROCR重组食蟹猴 Epcr / PROCR 蛋白 (Fc 标签) Protein

Insulin (from porcine pancreas 1mgInsulin (from porcine pancreas) 胰岛素

HMGB1重组人 HMGB1 / HMG1 蛋白 Protein

DPEP2 Protein Human 重组人 DPEP2 / MBD-2 蛋白 (Fc 标签)

BCL2L1 Protein Mouse 重组小鼠 BCL2L1 / Bcl-XL 蛋白 (aa 1-212, His 标签)

Insulin (from porcine pancreas 1mgInsulin (from porcine pancreas) 胰岛素

DPEP2 Protein Human 重组人 DPEP2 / MBD-2 蛋白 (Fc 标签)

PROCR重组食蟹猴 Epcr / PROCR 蛋白 (Fc 标签) Protein

BCL2L1 Protein Mouse 重组小鼠 BCL2L1 / Bcl-XL 蛋白 (aa 1-212, His 标签)

HMGB1重组人 HMGB1 / HMG1 蛋白 Protein

小鼠抗心0脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat ai glucoprotein 210 (gp210) ELISA Kit 大鼠抗核膜糖蛋白210抗体(gp210)检测试剂盒

HumanCardiacmyosin-lightchains1,CMLC-1ELISAKit 人心肌肌凝蛋白轻链1(CMLC-1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAmylin检测试剂盒人胰淀素(Amylin)检测试剂盒规格：96T/48T

植物蛋白巯基/结合巯基含量荧光定量检测试剂盒20次

MonkeyInsulin,INSELISAKit猴胰岛素(INS)检测试剂盒规格
：96T/48T

小鼠心脏纤维原细胞小鼠骨形成蛋白检测试剂盒   小鼠骨形成蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠骨形成蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源

：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠骨形成蛋白试剂盒、小鼠骨形成蛋白eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月。

小鼠胶原酶I检测试剂盒   小鼠胶原酶I试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠胶原酶I试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠胶原酶I试剂盒、小鼠胶原酶Ieisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月

。

小鼠胶原酶II检测试剂盒   小鼠胶原酶II试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠胶原酶II试剂盒，规格型号：96T/48T

，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：小鼠胶原酶II试剂盒
、小鼠胶原酶IIeisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠降钙素检测试剂盒   小鼠降钙素试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠降钙素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：小鼠降钙素试剂盒
、小鼠降钙素eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。