實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠心髒纖維原分離自心髒組織 ；心髒由心肌細胞和非心肌細胞組成 ，非心肌細胞占細胞總數的70% ，其中90%以上的非心肌細胞由心肌成纖維細胞組成 。纖維細胞是機能不活躍的成纖維細胞 。胞體呈梭形 ，胞質較少 ，弱嗜酸性 ，胞核小 ，染色深 。電鏡下可見 ，細胞中粗麵內質網和高爾基體均不發達 。當組織受損時 ，纖維細胞可轉化為成纖維細胞而參與修複過程 。纖維細胞和成纖維細胞是處於不同功能狀態的同一種細胞 ，如在組織損傷後的修複過程中 ，纖維細胞可轉化為功能活躍的成纖維細胞 。纖維細胞較小 ，呈多角形 ，胞質較少 ，弱嗜酸性，胞核亦較小 ，染色較深，電鏡下粗麵內質網較少 ，高爾基複合體不發達 。成纖維細胞較大 ，呈星形或梭形 ，有突起 ，細胞核呈卵圓形 ，染色質稀疏 ，染色淡 ，核仁明顯 ，胞質較多 。成纖維細胞能合成和分泌膠原蛋白 、彈性蛋白和蛋白多糖 ，形成膠原纖維 、彈性纖維和網狀纖維以及基質成分 。心肌成纖維細胞主要功能為對心肌細胞起結構支持作用並負責細胞基質外的合成 ，當心肌損傷時能產生旁分泌生長因子。心肌成纖維細胞是心髒結締組織中常見的細胞 ，可合成和分泌膠原纖維 、彈性纖維 、網狀纖維及有機基質 ，並且在外傷等因素刺激下 ，部分纖維細胞可重新轉變為幼稚的成纖維細胞 ，其功能活動也得以恢複 ，參與組織損傷後的修複 。因此 ，對心肌成纖維細胞的生理學研究成為現代心血管領域研究的一個重點 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠心髒纖維原采用膠原酶消化法製備而來製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠心髒纖維原經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠細胞色素P450氧化還原酶(CPR)檢測試劑盒  ，英文名 ： CPR ELISA Kit

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小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat ai glucoprotein 210 (gp210) ELISA Kit 大鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)檢測試劑盒

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