老哥俱乐部

细胞简介
：

小鼠心脏微血管周分离自心脏组织；心脏是脊椎动物身体中重要的一个器官，主要功能是为血液流动提供压力

，把血液运行至身体各个部分
。心脏由心肌构成，左心房

、左心室、右心房
、右心室四个腔组成。左右心房之间和左右心室之间均由间隔隔开，故互不相通
，心房与心室之间有瓣膜（房室瓣）
，这些瓣膜使血液只能由心房流入心室
，而不能倒流。心脏的作用是推动血液流动，向器官、组织提供充足的血流量，以供应氧和各种营养物质
，并带走代谢的终产物（如二氧化碳、无机盐、尿素和尿酸等）
，使细胞维持正常的代谢和功能
。心脏微血管内皮细胞是组成心脏微血管腔面单层扁平上皮样细胞，它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在心脏血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。近年来大量研究表明，心肌微血管周细胞的功能和病理改变直接影响心肌细胞功能，也是诸多毒素、炎症因子及病毒等重要靶位，其作为体外研究的细胞模型在心肌缺血-再灌注发病机制和细胞间旁分泌细胞生长因子研究中起着重要作用。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠心脏微血管周采用胶原酶消化法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠心脏微血管周经α-SMA免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传1-3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1

、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)检测试剂盒 
，英文名： EMMPRIN ELISA Kit

Mouse neuropeptide Y (NP-Y) ELISA Kit 小鼠神经肽Y(NP-Y)检测试剂盒

MouseapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 小鼠载脂蛋白B100(apo-B100)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHSP-90(MouseHeatShockProtein90)ELISAKit小鼠热休克蛋白90

细胞JNK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-2sRβ大鼠白介素2可溶性受体β链

NRP1重组食蟹猴 Neuropilin-1 / NRP1 蛋白 Protein

IL-2 (Interleukin-2 0.5mgIL-2 (Interleukin-2)Mouse
、Ret 白介素2抗原(大
、小鼠)

PDE4B重组人 PDE4B / DPDE4 蛋白 (His & GST 标签) Protein

DPEP1 Protein Human 重组人 Dehydropeptidase-I / DPEP1 蛋白

CHI3L1 Protein Mouse 重组小鼠 CHI3L1 / YKL40 / gp39 蛋白

IL-2 (Interleukin-2 0.5mgIL-2 (Interleukin-2)Mouse
、Ret 白介素2抗原(大、小鼠)

DPEP1 Protein Human 重组人 Dehydropeptidase-I / DPEP1 蛋白

NRP1重组食蟹猴 Neuropilin-1 / NRP1 蛋白 Protein

CHI3L1 Protein Mouse 重组小鼠 CHI3L1 / YKL40 / gp39 蛋白

PDE4B重组人 PDE4B / DPDE4 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human noradrenaline (NA) ELISA Kit 人去甲(NA)检测试剂盒

HumanFibrinELISAKit 人血纤蛋白(Fibrin)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanamiodarone,AD检测试剂盒人呋同(AD)检测试剂盒规格：96T/48T

植物蛋白巯基/结合巯基含量比色法定量检测试剂盒20次

MonkeyIerferonγ,IFN-γELISAKit猴γ干扰素(IFN-γ)检测试剂盒规格

：96T/48T

小鼠心脏微血管周细胞小鼠骨粘连蛋白(ON)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠骨形成蛋白(BMPs)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠骨特异性碱性0酸酶B(ALP-B)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液

、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。