老哥俱乐部

实验报告
：

一
、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min

；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠微血管周分离自微血管组织；周细胞（pericyte）又称Rouget细胞和壁细胞，是一种包围全身毛细血管和静脉中内皮细胞的细胞，可以收缩。周细胞嵌入毛细血管内皮细胞的基膜中，通过物理接触和旁分泌信号与内皮细胞进行细胞通讯，监视和稳定内皮细胞的成熟过程。此外

，周细胞还具有调控毛细血管血流量、细胞碎屑清除和吞噬以及血脑屏障渗透性的作用，其多功能性是目前研究的热点之一，所以对血管周细胞的生物学特征、标记物、细胞功能等的研究都为相关研究提供基础资料。周细胞产生手指状的外延以调控毛细血管的血流量。周细胞和内皮细胞之间共同拥有一个基膜

，基膜上有多种细胞连接
，包括多种整合素、神经钙黏素、纤连蛋白以及接合素。它还参与毛细血管直径的双向调控
；毛细血管受损时，周细胞还可增殖，分化为内皮细胞和成纤维细胞。

方法简介

：

公司实验室分离的小鼠血管周采用胶原酶-联合消化法及不锈钢网筛过滤法结合密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠微血管周经alpha-SMA免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠Agoi相关蛋白(AGRP)检测试剂盒
，英文名： AGRP ELISA Kit

Mouse osteopoin (OPN) ELISA Kit 小鼠骨桥素(OPN)检测试剂盒

Mousenuclearfactor-κBp65,NF-κBp65ELISAKit 小鼠核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumahrombopoietin,TPOELISAkit人血小板生成素

通用型羊弓形体刚地弓形虫(Toxotest;Toxoplasmagondii)试剂盒20次

ELISAKitHSP47大鼠热休克蛋白47

ERBB3重组恒河猴 HER3 / ErbB3 蛋白 Protein

Nanog fragment 干细胞关键蛋白(多肽 0.5mgNanog fragment 干细胞关键蛋白(多肽)

CA4重组人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 Protein

DDR2 Protein Human 重组人 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

CSNK2A1 Protein Mouse 重组小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白

Nanog fragment 干细胞关键蛋白(多肽 0.5mgNanog fragment 干细胞关键蛋白(多肽)

DDR2 Protein Human 重组人 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

ERBB3重组恒河猴 HER3 / ErbB3 蛋白 Protein

CSNK2A1 Protein Mouse 重组小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白

CA4重组人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 Protein

小鼠可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat macrophage inflammatory protein 1 alpha (MIP-1 alpha /CCL3) ELISA Kit 大鼠巨噬细胞症蛋白1α(MIP-1α/CCL3)检测试剂盒

Humanheparinsulphateprotoglycans,HSPGELISAKit 人硫酸肝素糖蛋白(HSPG)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanalkalinephosphatase,ALP检测试剂盒人碱性0酸酶(ALP)检测试剂盒规格：96T/48T

植物V型氢ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒20次

Mouse5-Hydroxyyptamine,5HTELISAKit小鼠5羟色胺(5-HT)检测试剂盒规格
：96T/48T

小鼠微血管周细胞小鼠环0酸鸟苷   英文名称：   cyclic adenosine monophosphate   规格：      英文缩写：   cGMP

小鼠睫状神经营养因子   英文名称：   ciliary neuroophic factor   规格：      英文缩写：   CF

白细胞分化抗原14   英文名称：   cluster of differeiation aigen 14   规格：      英文缩写：   CD14

可溶性细胞表面分化抗原40配体   英文名称
：   Soluble Cluster of differeiation aigen 40 ligand   规格
：      英文缩写：   sCD40L