老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠外周血中性粒分离自外周血
；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，老哥俱乐部把这样得到的干细胞称为外周血干细胞
，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念。白细胞是一类无色
、球形、有核的血细胞。白细胞不是一个均一的细胞群，根据其形态、功能和来源部位可以分为三大类：粒细胞
、单核细胞和淋巴细胞，其中粒细胞又可根据胞质中颗粒的染色性质不同，分为中性粒细胞
、嗜酸粒细胞和嗜碱粒细胞三种
。中性粒细胞是在瑞氏（Wright）染色血涂片中

，胞质呈无色或极浅的淡红色
，有许多弥散分布的细小的（0.2～0.4微米）浅红或浅紫色的颗粒。细胞核呈杆状或2～5分叶状，叶与叶间有细丝相连。中性粒细胞具趋化作用、吞噬作用和杀菌作用
。中性粒细胞来源于骨髓
，具有分叶形或杆状的核
，胞浆内含有大量既不嗜碱也不嗜酸的中性细颗粒。这些颗粒多是溶酶体

，内含髓过氧化酶、
、碱性磷酸酶和酸性水解酶等丰富的酶类
，与细胞的吞噬和消化功能有关
。中性粒细胞在血液的非特异性免疫中起着十分重要的作用，它处于机体抵御微生物病原体，特别是在化脓性细菌入侵的线，具有很强的吞噬活性
，可吞噬细菌、衰老的红细胞、抗原一抗体复合物和坏死的细胞等。中性粒细胞内含有大量溶酶体酶
，因此能将吞噬入细胞内的细菌和组织碎片分解
。当中性粒细胞吞噬数十个细菌后
，自身发生解体，所释出的各种溶酶体酶类能溶解周围组织而形成脓液。中性粒细胞是人体内寿命短的细胞
，一般体外培养12-24h内活性稳定
，48h活性下降，96h基本死亡
。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠外周血中性粒采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠外周血中性粒经瑞氏染色法，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 悬浮

细胞形态 圆形

传代特性 不增殖；不传代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定


：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

血管内皮抑素 (Endostatin)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

内皮素 -1(Endothelin-1)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

内啡肽 - b (Endorphin- b )   作用：   ELISA   规格

：      进口分装

内皮细胞合酶 (eNOS)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠游离状腺原酸(Free-T3)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai histone aibody of ai -DNA (H2A-H2B) / two mer -DNA aibody ELISA Kit 人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体试剂盒

Humanepithelialspecificaigen,ESAELISAKit 人上皮特异性抗原(ESA)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor8-iso-PG(Human8-isoprostaglandin)ELISAKit人8异前列腺素

异丁甲基细胞脂肪诱导生成比色法定量试剂盒20次

MouseMotilin,MTLELISAKit小鼠胃动素(MTL)试剂盒规格
：96T/48T

HA重组甲型流感 H7N9 (A/Zhejiang/ DTID-ZJU10/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

PAFR/PTAFR 血小板活化因子受体抗原 0.5mgPAFR/PTAFR 血小板活化因子受体抗原

LRP1重组人 LRP1 / A2MR / CD91 蛋白 (aa 786-1165) Protein

CCL23 Protein Human 重组人 CCL23 / MIP 3 蛋白

ALPL Protein Human 重组人 Alkaline Phosphatase / ALPL 蛋白

PAFR/PTAFR 血小板活化因子受体抗原 0.5mgPAFR/PTAFR 血小板活化因子受体抗原

CCL23 Protein Human 重组人 CCL23 / MIP 3 蛋白

HA重组甲型流感 H7N9 (A/Zhejiang/ DTID-ZJU10/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

ALPL Protein Human 重组人 Alkaline Phosphatase / ALPL 蛋白

LRP1重组人 LRP1 / A2MR / CD91 蛋白 (aa 786-1165) Protein

小鼠外周血中性粒细胞大鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)试剂盒 ，英文名： HIF-1α ELISA Kit

Porcine plasminogen activator inhibitor (PAI) ELISA Kit 猪纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)试剂盒

广州管圆线虫核酸试剂盒(荧光PCR法) 48T

CLIAKitforLRP-6(Humanlow-densitylipoprotein-receptor-relatedprotein)ELISAKit人低密度脂蛋白受体相关蛋白6

通用HRP酶联检测封闭溶液100毫升

ELISAKitsICAM-1鸡可溶性细胞间粘附分子1

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态

、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。