實驗報告 ：

一、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠氣管上皮分離自氣管組織 ；氣管（Trachea） ，呼吸器官的一部分 ；為後壁略平的圓筒型管狀 。上端平第六頸椎下緣 ，與環狀軟骨相連 ；向下至第四 、五胸椎體（相當胸骨角平麵）交界處 ，分左 、右主支氣管 ，分叉處稱為氣管杈 。氣管主要由14-16個半環狀軟骨構成 ，有彈性 ，軟骨為“C"字形的軟骨環 ，缺口向後 ，各軟骨環以韌帶連接起來 ，環後方缺口處由平滑肌和致密結締組織連接 ，保持了持續張開狀態 。管腔襯以粘膜 ，表麵覆蓋纖毛上皮 ，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒 ，纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出 ，以淨化吸入的氣體 。氣管上皮是氣道與外界環境接觸的道防線，不僅是各種病原體 、炎症介質作用的靶細胞 ，還作為效應細胞合成 、釋放多種炎性介質和細胞因子從而參與氣道炎症及免疫反應 。體外培養的原代氣管上皮細胞因與體內組織在形態結構和功能活動上存在很大的相似性 ，因此 ，在基礎及臨床研究中極為重要 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠氣管上皮采用-混合消化法結合差速貼壁法 ，並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠氣管上皮經PCK免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品 ：

血管緊張素轉化酶   英文名稱 ：   Angiotensin Conveing Enzyme   規格 ：      英文縮寫 ：   ACE

膜聯蛋白2   英文名稱 ：   Annexin 2   規格 ：      英文縮寫 ：   ANXA-2

骨堿性0酸酶   英文名稱 ：   bone alkaline phosphatase   規格 ：      英文縮寫 ：   BALP

凋亡因子BAX   英文名稱 ：   apoptogen BAX   規格 ：      英文縮寫 ：   BAX

小鼠抑製素A(INH-A)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human granulysin (granulysin) ELISA Kit 人顆粒溶素(granulysin)試劑盒

HumanGasinELISAKit 人胃泌素(Gasin)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor6-K-PGELISAKit大鼠6同前列腺素

飲料D-蘋果酸比色法定量試劑盒20次

MousemammarycarcinomaMarker-CA153ELISAKit小鼠癌標誌物-CA153試劑盒規格 ：96T/48T

CPM重組小鼠 Carboxypeptidase M / CPM 蛋白 Protein

β-血小板球蛋白(βTG)重組蛋白 Recombinant Beta-Thromboglobulin (bTG)

PRTFDC1重組人 PRTFDC1 蛋白 Protein

CCL7 Protein Human 重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白

CD63 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白

肝脂酶(LIPC)重組蛋白 Recombinant Lipase, Hepatic (LIPC)

CCL7 Protein Human 重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白

BGN重組小鼠 Biglycan / PG-S1 / BGN 蛋白 (Fc 標簽) Protein

THPO Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白

PDHA1重組人 PDHA1 / C54G1 蛋白1 (aa 30-390) Protein

小鼠氣管上皮細胞大鼠複製蛋白A 70kDaDNA結合亞基(RPA1)試劑盒  ，英文名 ： RPA1 ELISA Kit

Porcine methemoglobin (MHB) ELISA Kit 豬高鐵血紅蛋白(MHB)試劑盒

轉基因植物Sad1基因核酸試劑盒 48T

CLIAKitforMBP(Mousemyelinbasicprotein)ELISAKit小鼠髓0脂堿性蛋白

體液氧化型(GSSG)濃度比色法定量試劑盒50次

ELISAKitLp-PL-A2脂蛋脂酶A2