老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠气管软骨分离自气管组织
；气管（Trachea）

，呼吸器官的一部分；为后壁略平的圆筒型管状。上端平第六颈椎下缘，与环状软骨相连；向下至第四、五胸椎体（相当胸骨角平面）交界处，分左、右主支气管，分叉处称为气管杈。气管主要由14-16个半环状软骨构成
，有弹性，软骨为“C"字形的软骨环，缺口向后
，各软骨环以韧带连接起来
，环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接
，保持了持续张开状态。软骨由软骨细胞和细胞间质组成

。软骨内的基质呈凝胶状态
，具有较大韧性。软骨是以支持作用为主的结缔组织
。软骨内不含血管和淋巴管

，营养物由软骨膜内的血管中渗透到细胞间质中
，再营养骨细胞。根据细胞间质的不同可把软骨分为3种，即透明软骨
、弹性软骨和纤维软骨
。透明软骨的基质是由胶原纤维、原纤维和周围无定形的基质组成。在胚胎时期有临时支架作用，后来这种作用被骨代替。成人的透明软骨主要分布在气管和支气管壁中、肋骨的胸骨端和骨的表面（关节软骨）
。

方法简介：

实验室分离的小鼠气管软骨采用-胶原酶联合消化法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠气管软骨经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每3-4天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：梭形、多角形

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

小鼠气管软骨体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h

；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠神经疾病靶标酯酶(E)检测试剂盒
，英文名： E ELISA Kit

Mouse plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) ELISA Kit 小鼠纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)检测试剂盒

RatmajorhistocompatibilitycomplexⅠ,MHCⅠ/AgBⅠ/H-1ⅠELISAKit 大鼠主要组织相容性复合体Ⅰ类(MHCⅠ/AgBⅠ/H-1Ⅰ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHbC(HumanHemoglobinC)ELISAKit人血红蛋白C

细胞半胱蛋白酶-3(CASPASE-3)活性荧光定量检测试剂盒20次

RatVitaminD2,VD2ELISAKit大鼠2(VD2)检测试剂盒规格

：96T/48T

ACVR1重组狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白 Protein

NRF-1(nuclear respiratory factor-1 0.5mgNRF-1(nuclear respiratory factor-1) 核呼吸因子-1抗原

NTRK1重组人 TrkA / NTRK1 蛋白 (aa 285-413, His 标签) Protein

CXCL14 Protein Human 重组人 CXCL14 / BRAK 蛋白

IL36G Protein Mouse 重组小鼠 IL36G / IL1F9 蛋白

NRF-1(nuclear respiratory factor-1 0.5mgNRF-1(nuclear respiratory factor-1) 核呼吸因子-1抗原

CXCL14 Protein Human 重组人 CXCL14 / BRAK 蛋白

ACVR1重组狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白 Protein

IL36G Protein Mouse 重组小鼠 IL36G / IL1F9 蛋白

NTRK1重组人 TrkA / NTRK1 蛋白 (aa 285-413, His 标签) Protein

小鼠流行性出血热抗体(EHF-Ab)检测试剂盒 96T/48T

Rat keratinocyte aocrine factor (KAF) ELISA Kit / amphiregulin (AR) ELISA Kit 大鼠角化细胞内分泌因子(KAF)检测试剂盒/双调蛋白(AR)检测试剂盒

Humaenascin-R,TN-RELISAKit 人肌腱蛋白R(TN-R)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanActivinA,ACV-A检测试剂盒人活化素A(ACV-A)检测试剂盒规格：96T/48T

脂质过氧化物(linoleicacid)ELISA定量测定试剂盒48/96次

MouseAndrostenedione,ASDELISAKit小鼠雄烯二同(ASD)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠气管软骨细胞小鼠金属硫蛋白(MT)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠解偶联蛋白1(UCP1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠解脲脲原体抗体(UU-Ab)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1

：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。