細胞簡介 ：

小鼠氣管軟骨分離自氣管組織 ；氣管（Trachea） ，呼吸器官的一部分 ；為後壁略平的圓筒型管狀 。上端平第六頸椎下緣 ，與環狀軟骨相連 ；向下至第四 、五胸椎體（相當胸骨角平麵）交界處 ，分左 、右主支氣管 ，分叉處稱為氣管杈 。氣管主要由14-16個半環狀軟骨構成 ，有彈性 ，軟骨為“C"字形的軟骨環 ，缺口向後 ，各軟骨環以韌帶連接起來 ，環後方缺口處由平滑肌和致密結締組織連接 ，保持了持續張開狀態 。軟骨由軟骨細胞和細胞間質組成 。軟骨內的基質呈凝膠狀態 ，具有較大韌性 。軟骨是以支持作用為主的結締組織 。軟骨內不含血管和淋巴管 ，營養物由軟骨膜內的血管中滲透到細胞間質中 ，再營養骨細胞 。根據細胞間質的不同可把軟骨分為3種 ，即透明軟骨 、彈性軟骨和纖維軟骨 。透明軟骨的基質是由膠原纖維 、原纖維和周圍無定形的基質組成 。在胚胎時期有臨時支架作用 ，後來這種作用被骨代替 。成人的透明軟骨主要分布在氣管和支氣管壁中 、肋骨的胸骨端和骨的表麵（關節軟骨） 。

方法簡介 ：

實驗室分離的小鼠氣管軟骨采用-膠原酶聯合消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的小鼠氣管軟骨經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每3-4天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：梭形 、多角形

傳代特性 ：可傳3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

小鼠氣管軟骨體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠神經疾病靶標酯酶(E)檢測試劑盒  ，英文名 ： E ELISA Kit

Mouse plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) ELISA Kit 小鼠纖溶酶原激活物抑製因子1(PAI-1)檢測試劑盒

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CXCL14 Protein Human 重組人 CXCL14 / BRAK 蛋白

IL36G Protein Mouse 重組小鼠 IL36G / IL1F9 蛋白

NRF-1(nuclear respiratory factor-1 0.5mgNRF-1(nuclear respiratory factor-1) 核呼吸因子-1抗原

CXCL14 Protein Human 重組人 CXCL14 / BRAK 蛋白

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小鼠流行性出血熱抗體(EHF-Ab)檢測試劑盒 96T/48T

Rat keratinocyte aocrine factor (KAF) ELISA Kit / amphiregulin (AR) ELISA Kit 大鼠角化細胞內分泌因子(KAF)檢測試劑盒/雙調蛋白(AR)檢測試劑盒

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小鼠解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠解偶聯蛋白1(UCP1)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。