老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠脐动脉内皮分离自脐带组织；它是脐动脉的重要结构组成细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构，脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉，卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。在子宫中
，子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管，与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近，在此处母体和胎儿的血液间进行CO2和O2
，代谢产物即代谢废物和营养物质的交换

。脐动脉将胎儿产生的废物运送至胎盘，脐静脉将O2和营养物质从胎盘运送给胎儿。

方法简介
：

实验室分离的小鼠脐动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法
、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的小鼠脐动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息
：

包被条件：PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性
：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%；CO2，5%

小鼠脐动脉内皮体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)检测试剂盒 ，英文名： PⅢNP ELISA Kit

Mouse caspase 9 (Casp-9) ELISA Kit 小鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)检测试剂盒

Mouseisletcellaibody,ICAELISAKit 小鼠胰岛细胞抗体(ICA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumaetanusAibodyELISAKit人破伤风抗体

通用型洋李痘疱病毒(PlumPoxVirus;PPV)试剂盒20次

ELISAKitNA大鼠去甲

IL12B重组大鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (Fc 标签) Protein

Collagen V (Anti--Collagen Type V 0.5mgCollagen V (Anti--Collagen Type V ) Ⅴ型胶原(多肽)

LAIR2重组人 LAIR2 / CD306 蛋白 Protein

GBP1 Protein Human 重组人 GBP1 蛋白

ICOSLG Protein Mouse 重组小鼠 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 蛋白

Collagen V (Anti--Collagen Type V 0.5mgCollagen V (Anti--Collagen Type V ) Ⅴ型胶原(多肽)

GBP1 Protein Human 重组人 GBP1 蛋白

IL12B重组大鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (Fc 标签) Protein

ICOSLG Protein Mouse 重组小鼠 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 蛋白

LAIR2重组人 LAIR2 / CD306 蛋白 Protein

小鼠白三烯B4(LTB4)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat heat shock protein 60 (Hsp-60) ELISA Kit 大鼠热休克蛋白60(Hsp-60)检测试剂盒

HumanphosphoProteinKinaseC,P-PKCELISAKit 人0酸化蛋白激酶C(P-PKC)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancalcitoningenerelatedpeptide,CGRP检测试剂盒人降钙素基因相关肽(CGRP)检测试剂盒规格：96T/48T

中量真菌/酵母细胞基因组DNA化试剂盒10次

HumanSolubleprotein-100，S-100ELISAKit人S100蛋白(S-100)检测试剂盒规格

：96T/48T

小鼠脐动脉内皮细胞兔子皮质/上腺(CO)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子(Coisol)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子Ⅱ(FⅡ)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子受体()检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。