實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃ ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠胚胎成纖維分離自胚胎 ；成纖維細胞（Fibroblast）是疏鬆結締組織的主要細胞成分 ，由胚胎時期的間充質細胞分化而來 。成纖維細胞較大 ，輪廓清楚 ，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構 ，其細胞核呈規則的卵圓形 ，核仁大而明顯 。成纖維細胞功能活動旺盛 ，細胞質嗜弱堿性 ，具明顯的蛋白質合成和分泌活動 ，在一定條件下 ，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化 ；成纖維細胞對不同程度的細胞變性 、壞死和組織缺損的修複有著十分重要的作用 。剛分離的胚胎成纖維細胞呈圓形 、折光性良好 ，懸浮於培養基中 。30min細胞貼壁 ，其中部分開始伸出偽足 ，表現為小的突起 ；6h後細胞基本貼壁 ，伸展成梭形 ，胞核清晰 ，分布較均勻 ，散在生長 ，不聚集成團 ；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態 ，細胞排列緊密 ，有的交叉重疊生長 ，平坦 、胞體較大 ，細胞質透明 ，細胞核較大 ，呈橢圓形，顏色淡 。細胞融合 ，並彼此連接成網狀 ；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布 。細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布 。該細胞常用作ES細胞培養常用的飼養層細胞 ，能產生抑製ES細胞自主分化和促進ES細胞增殖的因子 ，故能有效地促進ES細胞的增殖並維持其未分化特性和多潛能性 ，且分泌效果優於外源添加的一些因子 ，而且可以為ES細胞的培養提供類似於體內的微環境 ，故在研究哺乳動物ES細胞中得到廣泛使用 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠胚胎成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠胚胎成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3-5代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

脫氫酶測試盒   紫外分光光度法   50管/48樣

還原糖含量測試盒   可見分光光度法   50管/24樣

纖維素酶（CL）測試盒   可見分光光度法   50管/24樣

豚鼠免疫球蛋白G2(IgG2)試劑盒  ，英文名 ： IgG2 ELISA Kit

Human granulysin (histatin 5) ELISA Kit 人富組蛋白(histatin 5)試劑盒

rabbitImmunoglobulinG,IgGELISAKit 兔子免疫球蛋白G(IgG)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBAFF-R(HumanBcellactivationfactorrfromthetumornecrosisfactorfamilyreceptor)ELISAKit人B細胞活化因子受體

線蟲補骨脂素(4-imethylpsoralen)誘導突變試劑盒10次

Rabbitcatecholamine,CAELISAKit兔兒茶酚胺(CA)試劑盒規格 ：96T/48T

IGFBP3重組人 IGFBP3 / IBP3 蛋白 Protein

結合蛋白4(RBP4)重組蛋白 Recombinant Retinol Binding Protein 4, Plasma (RBP4)

CD48重組人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

IL17RA Protein Human 重組人 IL17RA / CD217 蛋白

HA Protein H12N5 重組甲型流感 H12N5 (A/green-winged teal/ALB/199/1991) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

結合蛋白4(RBP4)重組蛋白 Recombinant Retinol Binding Protein 4, Plasma (RBP4)

IL17RA Protein Human 重組人 IL17RA / CD217 蛋白

IGFBP3重組人 IGFBP3 / IBP3 蛋白 Protein

HA Protein H12N5 重組甲型流感 H12N5 (A/green-winged teal/ALB/199/1991) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

CD48重組人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

小鼠胚胎成纖維細胞大鼠鈣調素(CAM)試劑盒  ，英文名 ： CAM ELISA Kit

Lester pig mononucleosis septozotocin (listeriolysin) ELISA Kit 豬單核細胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)試劑盒

轉基因植物NPTⅡ基因核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMCP-2/CCL8(Humanmonocytechemotacticprotein2)ELISAkit人單核細胞趨化蛋白2

體液腺苷酸環化酶(AdenylateCyclase)活性熒光定量試劑盒20次

ELISAKitIFN-α貓α幹擾素