老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化

；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠精原干分离自睾丸组织；精原干细胞是位于睾丸生精小管的生精上皮内的一群生精干细胞
，是成体内的定向干细胞。精原干细胞的一些优势使其成为动物转基因的理想宿主细胞

。精原干细胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多项生命活动的调节机制的深入研究，精子发生机理的进一步阐明以及精原干细胞转染，异体、异种移植技术的实际应用
，都迫切需要找到一种可行的方法将其分离纯化

，以期得到较高产量和纯度的有活力的精原细胞用于体外培养。在哺乳动睾丸内
，精子发生时一个受高度调控和持续的过程，精原干细胞（SSCs）一方面进行自我更新维持干细胞数量，另一方面又不断执行分化成各级生精细胞直至后生成精子。精原干细胞定居在曲精细管上皮的基膜处，是哺乳动物精子发生的原始细胞
，也是动物体内一起能将遗传信息传递的干细胞
。精原干细胞体外培养体系的建立，在生物学
、医学
、畜牧业生产及制备转基因动物等领域具有广阔的应用前景
。精原干细胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群细胞，具有自我更新能力和多向分化潜能，是哺乳动物体内能将遗传信息传递给下一代的成体干细胞。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠精原干采用先机械吹打
、后消化，结合Percoll密度梯度离心法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠精原干经CD44免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS

、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 悬浮

细胞形态 球形

传代特性 可传2-3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%
；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞


。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

大鼠白介素15(IL-15)检测试剂盒 ，英文名： IL-15 ELISA Kit

Mouse pyruvate kinase (PK) ELISA Kit 小鼠酸激酶(PK)检测试剂盒

ELISA 小鼠抑制素B(mouse Inhibin B)  进口分装

CLIAKitforIL-2R(MouseIerleukin-2receptor)ELISAkit小鼠白介素2受体

通用型离子(K)浓度化学比色法定量检测试剂盒50次

ELISAKitN-AChR大鼠型乙酰受体

CD47重组大鼠 CD47 蛋白 Protein

FoxP1(Forkhead box P1 0.5mgFoxP1(Forkhead box P1) FoxP1(T细胞转录因子)抗原

MICA重组人 MICA 蛋白 Protein

CST9L Protein Human 重组人 CST9L / Testatin 蛋白 (Fc 标签)

EPHA6 Protein Mouse 重组小鼠 EphA6 / EHK-2 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签)

FoxP1(Forkhead box P1 0.5mgFoxP1(Forkhead box P1) FoxP1(T细胞转录因子)抗原

CST9L Protein Human 重组人 CST9L / Testatin 蛋白 (Fc 标签)

CD47重组大鼠 CD47 蛋白 Protein

EPHA6 Protein Mouse 重组小鼠 EphA6 / EHK-2 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签)

MICA重组人 MICA 蛋白 Protein

小鼠内皮型合成酶(eNOS)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human spleen tyrosine kinase (Syk) ELISA Kit 人脾脏酪激酶(Syk)检测试剂盒

HumanATP-bindingcassetteanspoerA1,ABCA1ELISAKit 人腺苷三0酸结合 96T/48T 进口分装

HumanADisiegrinAndMetalloprotease10,ADAM10检测试剂盒人解整合素样金属蛋白酶10(ADAM10)检测试剂盒规格：96T/48T

正常男性人体肝组织S9组分(5毫克/毫升)500微升

MouseAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit小鼠抗核膜糖蛋白210抗体(gp210)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠精原干细胞小鼠抗心0脂抗体IgM(ACA-IgM)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠抗心0脂抗体IgG(ACA-IgG)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠抗心0脂抗体IgA(ACA-IgA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠抗心肌抗体(AMA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装