老哥俱乐部

细胞简介
：

小鼠晶状体上皮分离自晶状体组织；晶状体源自胚胎发育外胚层

，仅含有上皮细胞及其产物
，晶状体囊膜作为屏障将晶状体与其它类型细胞分开

；因而
，晶状体上皮细胞培养既无神经和血管组织的干扰
，又不受其它类型细胞如成纤维细胞的污染，保证了培养中细胞成分的单一性。晶状体上皮细胞主要负责调节晶状体的生理平衡
，包括电解质和液体的输送。在正常的发育过程中，晶状体上皮细胞分化和成熟
，然后迁移到晶状体内部
，产生晶体蛋白
，自身也拉长而变成晶状体纤维细胞，并终失去细胞核和其它的细胞器。研究表明，晶状体上皮细胞的分化和极化受到了眼部液体中的生长因子的调控，包括表皮生长因子和胰岛素等。细胞贴壁后为扁平不规则多角形，呈单层生长、连成膜状
。晶状体上皮细胞是紧密贴附于晶状体前囊内表面的单层上皮细胞，其异常增殖和分化与白内障和后囊混浊的发生密切相关，体外培养是研究其生长规律的主要手段。

方法简介

：

公司实验室分离的小鼠晶状体上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠晶状体上皮经BFSP2（晶状体蛋白）免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5


、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h

；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

心血管活性多肽   英文名称：   Apelin   规格：      英文缩写：   AP

转录因子AP-1   英文名称
：   anscription Factors AP-1   规格：      英文缩写：   AP-1

0酸化AKT蛋白   英文名称：   phosphorylation AKT   规格
：      英文缩写：   p-AKT

晚期糖基化终末产物   英文名称
：   advanced glycosylation end products   规格
：      英文缩写：   AGEs

小鼠胰岛素原(PI)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human soluble iercellular adhesion molecule 1 (sICAM-1) ELISA Kit 人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)试剂盒

HumanprocollagenCpeptidase,PCPELISAKit 人前胶原C端肽酶(PCP)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor26SPSM(Human26Sproteasome)ELISAKit人26S蛋白酶体

饮料甘素(dulcin)含量薄层色谱法定性试剂盒20次

MouseLeinizingHormone-ReleasingHormone,LHRHELISAKit小鼠黄体生成素释放激素(LHRH)试剂盒规格
：96T/48T

OSM重组小鼠 Oncostatin M / OSM 蛋白 Protein

白介素3(IL3)重组蛋白 Recombinant Interleukin 3 (IL3)

SRI重组人 SRI / Sorcin 蛋白 Protein

CD164 Protein Human 重组人 CD164 / Endolyn 蛋白

CLEC5A Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CLEC5A / MDL1 / MDL-1 蛋白

Apaf-1 (Apoptosis protease activating factor-1 0.5mgApaf-1 (Apoptosis protease activating factor-1)(NT) 凋亡蛋白活性因子-1(抗原)

CD164 Protein Human 重组人 CD164 / Endolyn 蛋白

FGFR1重组小鼠 FGFR1 / CD331 蛋白 Protein

CD5 Protein Rat 重组大鼠 CD5 蛋白 (Fc 标签)

ADM重组人 ADM / Adrenomedullin 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠晶状体上皮细胞大鼠高密度脂蛋白2(HDL2)试剂盒 ，英文名： HDL2 ELISA Kit

Porcine ierleukin 1 beta (IL-1 beta) ELISA Kit 猪白介素1β (IL-1β)试剂盒

埃博拉病毒(EBOV)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMHB(RatMethemoglobin,MHB)ELISAKit大鼠高铁血红蛋白

体液尿酸含量直接(TPTZ)比色法定量试剂盒50次

ELISAKitPCK牛0酸烯醇式同酸羧激酶

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。