老哥俱乐部

细胞简介
：

小鼠脊髓微血管内皮分离自脊髓组织
；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息
。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分，在椎管里面，上端连接延髓，两旁发出成对的神经，分布到四肢

、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形（蝴蝶型）灰质区，主要由神经细胞构成
；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经（称为脊神经）分布到全身皮肤
、肌肉和内脏器官。微血管又称毛细血管。分布于各种组织和细胞间的微细的血管
。介于微动脉和微静脉之间。平均直径7～9微米，数量极多
，成网状分布
。管壁由一层内皮细胞及一薄层基膜组成，厚约0.5微米
。基膜外面有薄层结缔组织，其中有纤维细胞、巨噬细胞和周细胞等。细的毛细血管由一个内皮细胞围成管腔
，较粗的毛细血管由2～3个内皮细胞围成。分布于肌肉组织、神经组织和结缔组织中的毛细血管
，内皮细胞间为缝隙连接（缝隙宽150埃）
，称连续毛细血管
；分布于内分泌腺、肾脏等处的毛细血管，除有缝隙连接外

，细胞本身有许多小孔，（孔径800～1000埃）
，称有孔毛细血管；分布于肝、脾、骨髓及某些内分泌腺的毛细血管，管腔扩大，称血窦。毛细血管的管壁薄
、通透性大、管径细（8～10微米）、数量多、血流速度慢，这些特点使其成为血液与组织液进行物质交换的场所，又称交换血管。血窦（sinusoid）由毛细血管管腔扩大而成，窦壁的一般结构与毛细血管壁相同

，由单层内皮细胞构成，内皮细胞膜上有窗孔。不同器官的窦壁结构各有差别
。脾血窦的内皮细胞间有较宽裂隙
；肝血窦内皮细胞是不连续的，有较宽的细胞隙（0.1～0.5微米）
；肝、脾血窦的基膜不完整或无基膜，通透性比毛细血管大
，较大的蛋白质和血细胞可以通过
。肝血窦壁内有枯否细胞
，脾血窦内外有巨噬细胞
，这两种细胞都有吞噬能力
，可吞噬清除血液中的异物、细菌等有害物质，是机体单核巨噬细胞系统的重要组成分。某些内分泌腺的血窦有连续的基膜
。

方法简介
：

实验室分离的小鼠脊髓微血管内皮采用 - 胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠脊髓微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基：含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液
：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%；CO2，5%

小鼠脊髓微血管内皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h


；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠Toll样受体4(TLR-4)检测试剂盒

，英文名
： TLR-4 ELISA Kit

Mouse resistin (Resistin) ELISA Kit 小鼠抵抗素(Resistin)检测试剂盒

ELISA 小鼠干细胞生长因子(mouse SCF)  进口分装

CLIAKitforIGF-2ELISAKit大鼠胰岛素样生长因子2

通用型诺瓦克病毒Norovirus试剂盒20次

ELISAKitICAM-2/CD102大鼠细胞间粘附分子2

CA9重组人 Carbonic Anhydrase IX / CA9 蛋白 Protein

颗粒酶A(GZMA)重组蛋白 Recombinant Granzyme A (GZMA)

CS重组人 Citrate synthase / CS 蛋白 Protein

CST2 Protein Human 重组人 Cystatin SA / CST2 蛋白

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

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CA9重组人 Carbonic Anhydrase IX / CA9 蛋白 Protein

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CS重组人 Citrate synthase / CS 蛋白 Protein

小鼠内脏脂肪特异性丝酸蛋白酶抑制剂(vaspin)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat basic fibroblast growth factor 4 (bFGF-4) ELISA Kit 大鼠碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)检测试剂盒

HumanCytotoxin-associatedprotein,CagAELISAKit 人细胞毒素相关蛋白A(CagA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Human6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1a检测试剂盒人6同前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)检测试剂盒规格：96T/48T

正常大鼠(SpragueDawley)肠组织微粒体组分(5毫克/毫升)500微升

MouseAi-myocardialaibody,AMAELISAKit小鼠抗心肌抗体(AMA)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠脊髓微血管内皮细胞小鼠抗中性粒/中心体抗体(ACA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠16α羟基雌1(16-αOHE-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。