實驗報告 ：

一、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠脊髓神經幹分離自脊髓組織 ；脊髓是細細的管束狀的神經結構 ，位於脊柱的椎管內且被脊椎保護 ；是源自腦的中樞神經係統延伸部分 。中樞神經係統的細胞依靠複雜的聯係來處理傳遞信息 。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經信息 。人和脊椎動物中樞神經係統的一部分 ，在椎管裏麵 ，上端連接延髓 ，兩旁發出成對的神經 ，分布到四肢 、體壁和內髒 。脊髓的內部有一個H形（蝴蝶型）灰質區 ，主要由神經細胞構成 ；在灰質區周圍為白質區 ，主要由有髓神經纖維組成 ；脊髓是許多簡單反射的中樞 。脊髓兩旁發出許多成對的神經（稱為脊神經）分布到全身皮膚、肌肉和內髒器官 。脊髓是周圍神經與腦之間的通路 ，也是許多簡單反射活動的低級中樞 。按脊神經的出入可把脊髓也分為相應的31節 ，31對脊神經就是由不同的脊椎發出的 。神經幹細胞是一類具有分裂潛能和自更新能力的母細胞 ，它可以通過不對等的分裂方式產生神經組織的各類細胞 。需要強調的是 ，在腦脊髓等所有神經組織中 ，不同的神經幹細胞類型產生的子代細胞種類不同 ，分布也不同 。神經幹細胞作為幹細胞的一種 ，它具有其它所有幹細胞的基本特征 ：具有自我維持和自我更新能力 ，具有多種分化潛能 ，具有分化為本係統大部分類型細胞的能力 ，這種自我更新和分化潛能可以維持相當長的時間甚至終生 ，對損傷和疾病具有反應能力 。神經幹細胞在疾病 、損傷狀態下具有增殖 、遷移 ，並向神經細胞 、星形膠質細胞和少突膠質細胞分化的能力 ，已成為神經係統損傷修複和再生研究的熱點 ，體外建立穩定的神經幹細胞培養模型是其基礎和臨床應用的前提 。神經幹細胞在培養3-4d後 ，可形成神經球 ，神經球在培養基中呈懸浮生長 。

方法簡介 ：

實驗室分離的小鼠脊髓神經幹采用消化後差速貼壁 ，結合神經幹細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的小鼠脊髓神經幹經Nestin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：基礎培養基 ，含B-27 Supplement 、EGF 、bFGF 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：懸浮

細胞形態 ：球形

傳代特性 ：可傳1-3代左右

消化液 ：0.25% ，Accutase

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

小鼠脊髓神經幹體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠硒蛋白P1(SEPP1)檢測試劑盒  ，英文名 ： SEPP1 ELISA Kit

Mouse retinol binding protein 4 (RBP-4) ELISA Kit 小鼠結合蛋白4(RBP-4)檢測試劑盒

MouseIerleukin23,IL-23ELISAKit 小鼠白介素23(IL-23)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHSP-27ELISAKit大鼠熱休克蛋白27

細胞MET激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-13大鼠白介素13

CD55重組小鼠 CD55 / DAF 蛋白 Protein

白介素2受體β(IL2Rβ)重組蛋白 Recombinant Interleukin 2 Receptor Beta (IL2Rb)

ERH重組人 ERH / DROER 蛋白 Protein

CST1 Protein Human 重組人 Cystatin SN / CST1 蛋白

COLEC12 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CLP1 / COLEC12 蛋白

白介素2受體β(IL2Rβ)重組蛋白 Recombinant Interleukin 2 Receptor Beta (IL2Rb)

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小鼠能a1A受體(ADRA1A)ELISA 試劑盒 96T/48T

Kappa aibodies to human immunoglobulin light chain (-IgLC) ELISA Kit 輕鏈kappa抗體(κ-IgLC)檢測試劑盒

HumanleucocyteaigenB27,HLA-B27ELISAKit 人類白細胞抗原B27(HLA-B27)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

FishhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRP檢測試劑盒魚類超敏C反應蛋白(hs-CRP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母蛋白巰基/結合巰基含量比色法定量檢測試劑盒20次

MouseComplemefragme3a,C3aELISAKit小鼠補體片斷3a(C3a)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠脊髓神經幹細胞小鼠抗中性粒細胞核周抗體(pANCA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗(AT)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝