老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介
：

小鼠脊髓神经干分离自脊髓组织；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息
。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分
，在椎管里面

，上端连接延髓
，两旁发出成对的神经，分布到四肢
、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形（蝴蝶型）灰质区
，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区
，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的中枢
。脊髓两旁发出许多成对的神经（称为脊神经）分布到全身皮肤
、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级中枢
。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。神经干细胞是一类具有分裂潜能和自更新能力的母细胞，它可以通过不对等的分裂方式产生神经组织的各类细胞。需要强调的是，在脑脊髓等所有神经组织中，不同的神经干细胞类型产生的子代细胞种类不同，分布也不同。神经干细胞作为干细胞的一种，它具有其它所有干细胞的基本特征：具有自我维持和自我更新能力
，具有多种分化潜能，具有分化为本系统大部分类型细胞的能力，这种自我更新和分化潜能可以维持相当长的时间甚至终生，对损伤和疾病具有反应能力。神经干细胞在疾病、损伤状态下具有增殖、迁移

，并向神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的能力
，已成为神经系统损伤修复和再生研究的热点
，体外建立稳定的神经干细胞培养模型是其基础和临床应用的前提
。神经干细胞在培养3-4d后，可形成神经球，神经球在培养基中呈悬浮生长
。

方法简介：

实验室分离的小鼠脊髓神经干采用消化后差速贴壁，结合神经干细胞专用培养基培养筛选制备而来
，总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的小鼠脊髓神经干经Nestin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基：基础培养基
，含B-27 Supplement
、EGF、bFGF
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性

：悬浮

细胞形态：球形

传代特性：可传1-3代左右

消化液
：0.25%，Accutase

培养条件
：气相
：空气，95%；CO2，5%

小鼠脊髓神经干体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液

、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意


： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠硒蛋白P1(SEPP1)检测试剂盒 ，英文名： SEPP1 ELISA Kit

Mouse retinol binding protein 4 (RBP-4) ELISA Kit 小鼠结合蛋白4(RBP-4)检测试剂盒

MouseIerleukin23,IL-23ELISAKit 小鼠白介素23(IL-23)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHSP-27ELISAKit大鼠热休克蛋白27

细胞MET激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-13大鼠白介素13

CD55重组小鼠 CD55 / DAF 蛋白 Protein

白介素2受体β(IL2Rβ)重组蛋白 Recombinant Interleukin 2 Receptor Beta (IL2Rb)

ERH重组人 ERH / DROER 蛋白 Protein

CST1 Protein Human 重组人 Cystatin SN / CST1 蛋白

COLEC12 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CLP1 / COLEC12 蛋白

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CST1 Protein Human 重组人 Cystatin SN / CST1 蛋白

CD55重组小鼠 CD55 / DAF 蛋白 Protein

COLEC12 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CLP1 / COLEC12 蛋白

ERH重组人 ERH / DROER 蛋白 Protein

小鼠能a1A受体(ADRA1A)ELISA 试剂盒 96T/48T

Kappa aibodies to human immunoglobulin light chain (-IgLC) ELISA Kit 轻链kappa抗体(κ-IgLC)检测试剂盒

HumanleucocyteaigenB27,HLA-B27ELISAKit 人类白细胞抗原B27(HLA-B27)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

FishhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRP检测试剂盒鱼类超敏C反应蛋白(hs-CRP)检测试剂盒规格
：96T/48T

真菌/酵母蛋白巯基/结合巯基含量比色法定量检测试剂盒20次

MouseComplemefragme3a,C3aELISAKit小鼠补体片断3a(C3a)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠脊髓神经干细胞小鼠抗中性粒细胞核周抗体(pANCA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠抗中性粒/中心体抗体(ACA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠抗(AT)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装