老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠脊髓成纤维分离自脊髓组织
；脊髓是细细的管束状的神经结构

，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息
。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分，在椎管里面
，上端连接延髓，两旁发出成对的神经
，分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形（蝴蝶型）灰质区
，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经（称为脊神经）分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路
，也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形
，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛
，细胞质嗜弱碱性
，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下

，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的脊髓成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形
，胞核清晰
，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大
，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形

，颜色淡。细胞融合

，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。脊髓成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持组织的正常形态
；合成和释放细胞外基质；组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠脊髓成纤维采用-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠脊髓成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min

，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠toll样受体3(TLR3)检测试剂盒 ，英文名： TLR3 ELISA Kit

Mouse eighth factor related aigen (F VIII Ag) ELISA Kit 小鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)检测试剂盒

ELISA 小鼠基质细胞衍生因子-1a(mouse SDF-1a)  进口分装

CLIAKitforIGF-1ELISAKit大鼠胰岛素样生长因子1

通用型苹果酸脱氢酶(MDH)活性比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitPeosidine大鼠戊糖素

TFRC重组食蟹猴 Transferrin Receptor / TFRC / CD71 蛋白 Protein

integrin Beta1(ITG- Beta1/CD29 0.5mgintegrin Beta1(ITG- Beta1/CD29) 粘附分子整合素β1抗原

MICA重组人 MICA 蛋白 Protein

FHIT Protein Human 重组人 Fragile histidine triad / FHIT 蛋白

SIRPA Protein Mouse 重组小鼠 SIRP alpha / CD172a 蛋白 (Fc 标签)

integrin Beta1(ITG- Beta1/CD29 0.5mgintegrin Beta1(ITG- Beta1/CD29) 粘附分子整合素β1抗原

FHIT Protein Human 重组人 Fragile histidine triad / FHIT 蛋白

TFRC重组食蟹猴 Transferrin Receptor / TFRC / CD71 蛋白 Protein

SIRPA Protein Mouse 重组小鼠 SIRP alpha / CD172a 蛋白 (Fc 标签)

MICA重组人 MICA 蛋白 Protein

小鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat coagulation factor XIII (F x) ELISA Kit 大鼠Ⅹ(FⅩ)检测试剂盒

HumanGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit 人糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanbacterialvaginosis,BV检测试剂盒人细菌(BV)检测试剂盒规格：96T/48T

植物蔗糖0酸合成酶(sucrosephosphatesyhase)活性比色法定量检测试剂盒20次

Huma-Hglycoprotein,THPELISAKit人TH糖蛋白(THP)检测试剂盒规格
：96T/48T

小鼠脊髓成纤维细胞豚鼠组胺(HIS)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

豚鼠转化生长因子β1(TGF-β1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

豚鼠主要组织相容性复合体(MHC/GPLA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

豚鼠坏死因子α(TNF-α)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。