老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠海绵体平滑肌分离自海绵体组织；海绵体，又称海绵体肌，是硬的平滑肌和结缔组织
。海绵体是一种勃起组织
，外面包有坚厚的白膜，内部由结缔组织和平滑肌组成海绵状支架，其腔隙与血管相通。它主要包括海绵体内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞3种细胞成分。其中平滑肌细胞和成纤维细胞镶嵌于海绵体细胞外基质的胶原中
，在消化海绵体组织时
，胶原酶的作用主要是松解海绵体内皮细胞与基膜的联系，破坏海绵体内皮细胞间的紧密连接
。因此可用胶原酶分离出海绵体平滑肌细胞。平滑肌，是非横纹肌的肌肉组织。分布在人体动脉和静脉血管壁、膀胱、子宫、男性和女性生殖道、消化道、呼吸道
、眼睛的睫状肌和虹膜。平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形

、不规则形、三角形或扇形

，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富
，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长
，高低起伏
；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快
，4-6天即可汇合
，并保持上述形态学特征和生长特点
。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠海绵体平滑肌采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠海绵体平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS
、生长添加剂

、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传1-3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相

：空气
，95%

；CO2

，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

血红素氧化酶 (HO-1)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

热休克蛋白 27(HSP27)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

热休克蛋白 70(HSP70)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

HA 丝酸肽酶 1 (Ha1)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai neuophil aibody (ANA) ELISA Kit 人抗中性粒细胞抗体(ANA)试剂盒

Humacellreceptor,TCRELISAKit 人T细胞受体(TCR)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforABeta1-40ELISAKit大鼠β淀粉样蛋白1-40

乙基十六烷基二甲基溴化胺(cetyldimethylethammoniumbromide)1公斤

Mousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAKit小鼠髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCAIgG)试剂盒规格：96T/48T

NA重组甲型流感 H1N1 神经酶 (Neuraminidase / NA) (H274Y mutation) (高活性) Protein

Rad51 Rad51抗原 0.5mgRad51 Rad51抗原

GFRA1重组人 GFRA1 / GFRα1 / GDNFRA 蛋白 Protein

CCL18 Protein Human 重组人 CCL18 / PARC / MIP4 蛋白

FAS Protein Human 重组人 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 蛋白 (Fc 标签)

Rad51 Rad51抗原 0.5mgRad51 Rad51抗原

CCL18 Protein Human 重组人 CCL18 / PARC / MIP4 蛋白

NA重组甲型流感 H1N1 神经酶 (Neuraminidase / NA) (H274Y mutation) (高活性) Protein

FAS Protein Human 重组人 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 蛋白 (Fc 标签)

GFRA1重组人 GFRA1 / GFRα1 / GDNFRA 蛋白 Protein

小鼠海绵体平滑肌细胞大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)试剂盒 ，英文名： BMP-2 ELISA Kit

Porcine procollagen peptide (P III NP) ELISA Kit 猪Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)试剂盒

埃博拉病毒(EBOV)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMIP-5(Humanmacrophageinflammatoryprotein5)ELISAKit人巨噬细胞性蛋白5

体液结构型内皮细胞合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性比色法定量试剂盒20次

ELISAKitCD8犬白细胞分化抗原8

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。