老哥俱乐部

细胞简介
：

小鼠海绵体内皮分离自海绵体组织；阴茎海绵体是由海绵状的小梁和腔隙构成的血窦结构，它主要包括海绵体内皮细胞
、平滑肌细胞和成纤维细胞3种细胞成分。其中平滑肌细胞和成纤维细胞镶嵌于海绵体细胞外基质的胶原中
，而海绵体内皮细胞则覆盖于海绵体血窦的腔面
，仅占海绵体组织的2.8%。在消化海绵体组织时，胶原酶的作用主要是松解海绵体内皮细胞与基膜的联系，破坏海绵体内皮细胞间的紧密连接。如果消化时间延长或胶原酶浓度过大
，平滑肌细胞和成纤维细胞也将被消化下来，从而影响海绵体内皮细胞的纯度。因此，比较筛选合适的胶原酶浓度和消化时间是成功分离海绵体内皮细胞的关键。

方法简介

：

公司实验室分离的小鼠海绵体内皮采用混合酶消化法结合机械分离法、并用内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠海绵体内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等

。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气


，95%；CO2，5%

实验报告
：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定


：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6

、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠淋巴细胞趋化因子(Lptn)检测试剂盒 ，英文名
： Lptn ELISA Kit

Mouse hepatitis B core aibody (HBcAb) ELISA Kit 小鼠乙型肝核心抗体(HBcAb)检测试剂盒

RatPerinuclearai-neuophilcytoplasmicaibody,pANCAELISAKit 大鼠抗中性粒细胞核周抗体(pANCA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGATA4ELISAKitmuman人GATA结合蛋白4检测试剂盒

细胞合成酶活性比色法定量检测试剂盒20次

RatP-SelectinELISAKit大鼠P选择素(P-Selectin/CD62P)检测试剂盒规格：96T/48T

CLEC1A重组大鼠 CLEC1A / CLEC-1 蛋白 (Fc 标签) Protein

GIP (Gastric Inhibitory polypeptide 0.5mgGIP (Gastric Inhibitory polypeptide) 胃泌素抑制肽(抗原)

FCGR3A重组人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 标签), Biotinylated Protein

FAM19A2 Protein Human 重组人 FAM19A2 蛋白 (Fc 标签)

FCGR4 Protein Mouse 重组小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 标签)

GIP (Gastric Inhibitory polypeptide 0.5mgGIP (Gastric Inhibitory polypeptide) 胃泌素抑制肽(抗原)

FAM19A2 Protein Human 重组人 FAM19A2 蛋白 (Fc 标签)

CLEC1A重组大鼠 CLEC1A / CLEC-1 蛋白 (Fc 标签) Protein

FCGR4 Protein Mouse 重组小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 标签)

FCGR3A重组人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 标签), Biotinylated Protein

小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat Mueller tube inhibitory substance / ai Mueller tube hormone (MIS/AMH) ELISA Kit 大鼠缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素(MIS/AMH)检测试剂盒

HumanC-typenaiureticpeptide,CNPELISAKit 人C型尿肽(CNP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-rabiesvirusaibody,ai-RV检测试剂盒人抗狂犬病毒抗体(ai-RV)检测试剂盒规格：96T/48T

植物氧化酶活性测定试剂盒20次

Humaumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand1,AIL-R1ELISAKit人坏死因子相关凋亡诱导配体1(AIL-R1)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠海绵体内皮细胞小鼠P物质检测试剂盒   小鼠P物质试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠P物质试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名
：小鼠P物质试剂盒、小鼠P物质eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

小鼠p53检测试剂盒   小鼠p53试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠p53试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装）

，产品别名
：小鼠p53试剂盒、小鼠p53eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月
。

小鼠N端前脑素检测试剂盒   小鼠N端前脑素试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠N端前脑素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：小鼠N端前脑素试剂盒、小鼠N端前脑素eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期

：6个月
。

小鼠L选择素检测试剂盒   小鼠L选择素试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠L选择素试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠L选择素试剂盒
、小鼠L选择素eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

注意事项


：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。