實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠骨分離自骨組織 ；骨組織的細胞成分包括骨原細胞 、成骨細胞 、骨細胞和破骨細胞 。隻有骨細胞存在於骨組織內 ，其他三種細胞均位於骨組織的邊緣 。骨細胞（Osteocyte）是人體骨骼中主要的細胞成分 。在成年人骨骼中 ，骨細胞占細胞總數量的90%～95% ，大約是成骨細胞數量的20倍 。骨細胞生長在骨骼內部的骨基質中 。骨細胞的細胞體呈梭形或類圓形 ，位於基質構成的骨陷窩內 。與神經細胞類似 ，每個骨細胞具有大量向外延伸的突觸 ，而這些突觸均位於由骨基質構成的骨小管結構中 。通過這些突觸 ，骨細胞能夠與骨表麵的細胞 、周圍其它的骨細胞進行“交流" 。普遍認為 ，骨細胞起源於成骨細胞 。在骨形成的終末階段 ，成骨細胞將可能有3種不同的歸宿 ：分化成為骨細胞 、轉移至骨表麵成為暫不活動的成骨細胞 、進入程序死亡過程（凋亡） 。骨細胞為扁橢圓形多突起的細胞 ，核亦扁圓 、染色深 。胞質弱嗜堿性 。電鏡下 ，胞質內有少量溶酶體 、線粒體和粗麵內質網 ，高爾基複合體亦不發達 。骨細胞夾在相鄰兩層骨板間或分散排列於骨板內 。相鄰骨細胞的突起之間有縫隙連接 。在骨基質中 ，骨細胞胞體所占據的橢圓形小腔 ，稱為骨陷窩 ，其突起所在的空間稱骨小管 。相鄰的骨陷窩借骨小管彼此通連 。骨陷窩和骨小管內均含有組織液 ，骨細胞從中獲得養分 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠骨采用膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠骨經骨鈣素免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV、支原體、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 屬於終末分化細胞 ；屬於不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

轉基因植物NPTⅡ基因核酸試劑盒   48T

轉基因植物Bar基因核酸試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

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豬胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA 試劑盒

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BPI Protein Human 重組人 BPI 蛋白 (His 標簽)

PLA2G1B Protein Mouse 重組小鼠 PLA2G1B / Phospholipase-A2 蛋白 (His 標簽)

GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein 0.5mgGFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein) 膠質纖維酸性蛋白(抗原)

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PLA2G1B Protein Mouse 重組小鼠 PLA2G1B / Phospholipase-A2 蛋白 (His 標簽)

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小鼠骨細胞大鼠骨鈣素(OT)試劑盒  ，英文名 ： OT ELISA Kit

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體液基質金屬蛋白酶(MMP-9)明膠法比色定量試劑盒20次

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