細胞簡介 ：

小鼠骨外膜分離自骨外膜組織 ；骨外膜是指成骨細胞與破骨細胞緊貼骨密質外麵包著的那層膜 ；在骨外膜和骨內膜中含有一種能夠生成骨的細胞 ，稱為成骨細胞 ，這種細胞具有使骨骼生長的功能 。在骨外膜中還有另外一種專門破壞骨細胞的細胞 ，稱為破骨細胞 。這兩種細胞作用相反又相互依據 。成骨細胞像建築工人 ，不停地生成新的骨組織 ，破骨細胞則像維修工人 ，不停地清除老化 、死亡 、破碎的骨結構 ，並且還負責拆除“違章建築" ，就是除去不需要的多餘的骨組織 ，從而使骨的整體結構更符合生物力學的需要 。正常情況下 ，兩種細胞之間處於動態的平衡之中 ，完成骨的生長發育的新陳代謝 。骨折之後 ，成骨細胞先啟動 ，從而促使新骨痂的生成 ，即骨折的愈合 。但是 ，股痂隻是恢複了骨的連續性 ，往往不符合生物力學的需要 ，改建塑形的過程則必須有破骨細胞的參與才能完成 。

方法簡介 ：

實驗室分離的小鼠骨外膜采用膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的小鼠骨外膜經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳2-3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

小鼠骨外膜體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠腫瘤蛋白p53(TP53)檢測試劑盒  ，英文名 ： TP53 ELISA Kit

Mouse soluble cell differeiation aigen 30 (sCD30) ELISA Kit 小鼠可溶性白細胞分化抗原30(sCD30)檢測試劑盒

MouseE-SelectinELISAkit 小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanIg-likeanscriptsReceptor,ILTsRELISAKit樣轉錄體受體

微型RNA文庫數據庫(在建)會員製

ELISAKitADAM8大鼠解整合素樣金屬蛋白酶8

CPA2重組人 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白 Protein

內分泌腺來源血管內皮生長因子(EG-VEGF)重組蛋白 Recombinant Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF)

ERBB4重組人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白 Protein

CSNK1G1 Protein Human 重組人 CSNK1G1 / CKI-gamma 1 蛋白 (His & GST 標簽)

NA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 神經酸酶 (Neuraminidase / NA) (N295S mutation) (高活性)

內分泌腺來源血管內皮生長因子(EG-VEGF)重組蛋白 Recombinant Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF)

CSNK1G1 Protein Human 重組人 CSNK1G1 / CKI-gamma 1 蛋白 (His & GST 標簽)

CPA2重組人 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白 Protein

NA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 神經酸酶 (Neuraminidase / NA) (N295S mutation) (高活性)

ERBB4重組人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白 Protein

小鼠受體()ELISA 試劑盒 96T/48T

Human coagulation factor XIII (F XIII) ELISA Kit 人ⅩⅢ(FⅩⅢ)檢測試劑盒

Humananspoerassociatedwithaigenprocessing,TAPELISAKit 人抗原處理相關轉運蛋白(TAP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human2,3-dinohromboxaneB2,2,3-dinor-TXB2檢測試劑盒人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母細胞樣品氧化酶活性測定試劑盒20次

Mouseapoprotein,apo-A1ELISAKit小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠骨外膜細胞小鼠可溶性白細胞分化抗原86(B7-2/sCD86)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(sCD40L)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠可溶性白細胞分化抗原30配體(sCD30L)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠可溶性白細胞分化抗原30(sCD30)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。