老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠骨外膜分离自骨外膜组织；骨外膜是指成骨细胞与破骨细胞紧贴骨密质外面包着的那层膜；在骨外膜和骨内膜中含有一种能够生成骨的细胞，称为成骨细胞，这种细胞具有使骨骼生长的功能。在骨外膜中还有另外一种专门破坏骨细胞的细胞，称为破骨细胞。这两种细胞作用相反又相互依据。成骨细胞像建筑工人，不停地生成新的骨组织，破骨细胞则像维修工人，不停地清除老化
、死亡
、破碎的骨结构
，并且还负责拆除“违章建筑"
，就是除去不需要的多余的骨组织

，从而使骨的整体结构更符合生物力学的需要。正常情况下，两种细胞之间处于动态的平衡之中
，完成骨的生长发育的新陈代谢。骨折之后，成骨细胞先启动，从而促使新骨痂的生成，即骨折的愈合
。但是，股痂只是恢复了骨的连续性
，往往不符合生物力学的需要，改建塑形的过程则必须有破骨细胞的参与才能完成。

方法简介：

实验室分离的小鼠骨外膜采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠骨外膜经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代左右

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气
，95%
；CO2

，5%

小鼠骨外膜体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠肿瘤蛋白p53(TP53)检测试剂盒 ，英文名
： TP53 ELISA Kit

Mouse soluble cell differeiation aigen 30 (sCD30) ELISA Kit 小鼠可溶性白细胞分化抗原30(sCD30)检测试剂盒

MouseE-SelectinELISAkit 小鼠E选择素(E-Selectin/CD62E)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanIg-likeanscriptsReceptor,ILTsRELISAKit样转录体受体

微型RNA文库数据库(在建)会员制

ELISAKitADAM8大鼠解整合素样金属蛋白酶8

CPA2重组人 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白 Protein

内分泌腺来源血管内皮生长因子(EG-VEGF)重组蛋白 Recombinant Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF)

ERBB4重组人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白 Protein

CSNK1G1 Protein Human 重组人 CSNK1G1 / CKI-gamma 1 蛋白 (His & GST 标签)

NA Protein H1N1 重组甲型流感 H1N1 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (N295S mutation) (高活性)

内分泌腺来源血管内皮生长因子(EG-VEGF)重组蛋白 Recombinant Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF)

CSNK1G1 Protein Human 重组人 CSNK1G1 / CKI-gamma 1 蛋白 (His & GST 标签)

CPA2重组人 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白 Protein

NA Protein H1N1 重组甲型流感 H1N1 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (N295S mutation) (高活性)

ERBB4重组人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白 Protein

小鼠受体()ELISA 试剂盒 96T/48T

Human coagulation factor XIII (F XIII) ELISA Kit 人ⅩⅢ(FⅩⅢ)检测试剂盒

Humananspoerassociatedwithaigenprocessing,TAPELISAKit 人抗原处理相关转运蛋白(TAP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Human2,3-dinohromboxaneB2,2,3-dinor-TXB2检测试剂盒人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞样品氧化酶活性测定试剂盒20次

Mouseapoprotein,apo-A1ELISAKit小鼠载脂蛋白A1(apo-A1)检测试剂盒规格
：96T/48T

小鼠骨外膜细胞小鼠可溶性白细胞分化抗原86(B7-2/sCD86)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠可溶性白细胞分化抗原30配体(sCD30L)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠可溶性白细胞分化抗原30(sCD30)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。