老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠骨髓树突状分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织
，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用

，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等
；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨质间的网眼中
，是一种海绵状的组织
，能产生血细胞的骨髓略呈红色
，称为红骨髓

。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大
，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨髓DC细胞是由骨髓单核细胞诱导而成的；DC细胞，全称树突状细胞(DC)，是近年来倍受们关注的专职抗原呈递细胞(APC)
，能摄取

、加工及呈递抗原，启动T细胞介导的免疫反应。由美国学者Steinman于1973年在淋巴结中发现
，从脾脏中分离出一类与粒细胞
、巨噬细胞和淋巴细胞形态和功都不同的白细胞，因其细胞膜向外伸出，形成与神经细胞轴突相似的膜性树状突起，故而命名为树突状细胞。未成熟DC具有较强的迁移能力，成熟DC能有效激活初始型T细胞，处于启动
、调控、并维持免疫应答的中心环节
。

方法简介

：

公司实验室分离的小鼠骨髓DC采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞、培养过程添加细胞因子诱导而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠骨髓树突状(DC细胞)经CD86免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 半贴半悬浮

细胞形态 树突状

传代特性 属于高度分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠中性粒细胞激活蛋白3(NAP3)检测试剂盒 
，英文名： NAP3 ELISA Kit

Mouse soluble cell differeiation aigen 86 (B7-2/sCD86) ELISA Kit 小鼠可溶性白细胞分化抗原86(B7-2/sCD86)检测试剂盒

MouseFibronectin,FNELISAKit 小鼠纤连蛋白(FN)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanhypotheticalproteinLOC433328ELISAKit人假定蛋白LOC433328

B12高效液相色谱法定量检测试剂盒20次

ELISAKitCTGF大鼠结缔组织生长因子

CD84重组小鼠 CD84 蛋白 Protein

UL16结合蛋白2(ULBP2)重组蛋白 Recombinant UL16 Binding Brotein 2 (ULBP2)

EPHA3重组人 EphA3 蛋白 Protein

CSNK1A1 Protein Human 重组人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 标签)

EPCAM Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 (Fc 标签)

钙结合蛋白(CR)重组蛋白 Recombinant Calretinin (CR)

CSNK1A1 Protein Human 重组人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 标签)

PTPRC重组小鼠 CD45 / PTPRC 蛋白 (aa 453-1152, His & GST 标签) Protein

IL13 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白

CRIPT重组人 CRIPT / cysteine-rich PDZ-binding 蛋白 Protein

小鼠Ⅸ(FⅨ)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human coagulation factor VIII related aigen (VIII -Ag) ELISA Kit 人Ⅷ相关抗原(Ⅷ-Ag)检测试剂盒

Humanenkephalin,ENKELISAKit 人脑啡肽(ENK)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Human17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCS检测试剂盒人17羟皮质类固醇(17-OHCS)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒20次

MouseAquaporin1,AQP-1ELISAKit小鼠水通道蛋白1(AQP-1)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠骨髓树突状细胞(DC细胞)小鼠可溶性肌球蛋白重链2(sMHC-2)ElisaKit   ELISA.   96T/48T

小鼠可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)ElisaKit   ELISA.   96T/48T

小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血管紧张素转化酶(ACE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片


，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。