老哥俱乐部

细胞简介
：

小鼠肺血管平滑肌分离自肺组织
；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上
。肺有分叶
，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉
、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍
。肺血管平滑肌细胞原代分离培养3天后

，可见细胞贴壁伸展
，细胞形态大小不一
，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合
，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏
；细胞密度低时，常交织成网状
；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。肺血管平滑肌细胞主要功能：①细胞表面表达介质（ICAM-1和VCAM-1）参与血管壁炎症反应；②是多数重要动脉疾病的靶细胞。肺血管平滑肌细胞与主要病生理变化：①平滑肌增生易致肺动脉高压；②先天性肺动脉狭窄
；③肺动脉栓塞
。血管平滑肌细胞的加速生长潜能是血管疾病进展的关键因素，新研究表明血管平滑肌细胞表达的ICAM-1和VCAM-1能促进血管壁的炎症反应，并且与血管疾病的发展及稳定性有关。

方法简介

：

公司实验室分离的小鼠肺血管平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肺血管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin

、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min

；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠脂肪酸转运蛋白5(FATP5)检测试剂盒
，英文名
： FATP5 ELISA Kit

Mouse soluble vascular cell adhesion molecule 1 (sVCAM-1) ELISA Kit 小鼠可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)检测试剂盒

MouseIerferonγ,IFN-γELISAKit 小鼠γ干扰素(IFN-γ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanHighmobilitygroupproteinB1,HMGB-1ELISAKit人高迁移率族蛋白B1

B6高效液相色谱法定量检测试剂盒20次

ELISAKitCT大鼠降钙素

ROBO4重组小鼠 ROBO4 蛋白 Protein

白介素5(IL5)重组蛋白 Recombinant Interleukin 5 (IL5)

GABARAPL2重组人 GATE-16 / GABARAPL2 蛋白 Protein

CSF1 Protein Human 重组人 / 食蟹猴 M-CSF / CSF-1 蛋白

CD4 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD4 蛋白

白介素5(IL5)重组蛋白 Recombinant Interleukin 5 (IL5)

CSF1 Protein Human 重组人 / 食蟹猴 M-CSF / CSF-1 蛋白

ROBO4重组小鼠 ROBO4 蛋白 Protein

CD4 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD4 蛋白

GABARAPL2重组人 GATE-16 / GABARAPL2 蛋白 Protein

小鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat maix metalloproteinase 7 (MMP-7) ELISA Kit 大鼠基质金属蛋白酶7(MMP-7)检测试剂盒

Humanmacrophagestimulatingprotein,MSPELISAKit 人巨噬细胞刺激蛋白(MSP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HamsterCathepsinK,cath-K检测试剂盒仓鼠组织蛋白酶K(cath-K)检测试剂盒规格
：96T/48T

真菌/酵母细胞染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒20次

MouseBonemorphogeneticprotein2,BMP-2ELISAKit小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)检测试剂盒规格
：96T/48T

小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠0酸化蛋白激酶检测试剂盒   小鼠0酸化蛋白激酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠0酸化蛋白激酶试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：小鼠0酸化蛋白激酶试剂盒、小鼠0酸化蛋白激酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠抗核膜糖蛋白210抗体检测试剂盒   小鼠抗核膜糖蛋白210抗体试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠抗核膜糖蛋白210抗体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠抗核膜糖蛋白210抗体试剂盒、小鼠抗核膜糖蛋白210抗体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠基质金属蛋白酶检测试剂盒   小鼠基质金属蛋白酶试剂盒   规格型号

：96T/48T   小鼠基质金属蛋白酶试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：小鼠基质金属蛋白酶试剂盒、小鼠基质金属蛋白酶eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠肺表面活性物质相关蛋白检测试剂盒   小鼠肺表面活性物质相关蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠肺表面活性物质相关蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：小鼠肺表面活性物质相关蛋白试剂盒
、小鼠肺表面活性物质相关蛋白eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养


。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。