老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠肺微血管内皮分离自肺组织
；肺是机体的呼吸器官
，位于胸腔，左右各一
，覆盖于心之上
。肺有分叶
，左二右三

，共五叶

。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉


、鼻相连，故称喉为肺之门户
，鼻为肺之外窍。微血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理及炎症反应。细胞呈梭形或多角形，形成单层后呈鹅卵石样或铺路石样排列。肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障

，该屏障对于肺气体交换
，调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义
。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠肺微血管内皮采用组织贴块法并结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肺微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液


，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次
，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

猪白介素2(IL-2)试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪白介素1β(IL-1β)试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪白介素1α(IL-1α)试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA 试剂盒

Human a disiegrin and metalloproteinase 8 (ADAM8) ELISA Kit 人解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)试剂盒

Porcineniicoxide,NOELISAKit 猪血清(NO)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlpha2-PI(HumanAlpha2-plasmininhititor)ELISAKit人α2纤溶酶抑制物

血液酪酶(tyrosinase)活性比色法定量试剂盒20次

NudeMouseClaracellprotein,CC16ELISAKit裸鼠克拉拉细胞蛋白(CC16)试剂盒

HA重组甲型流感 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签) Protein

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) 海葵神经毒素(35肽)

S100A9重组人 S100A9 / CAGB / P14 蛋白 Protein

AMTN Protein Human 重组人 AMTN / Amelotin 蛋白

LXN Protein Human 重组人 Latexin / LXN / TCI 蛋白

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) 海葵神经毒素(35肽)

AMTN Protein Human 重组人 AMTN / Amelotin 蛋白

HA重组甲型流感 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签) Protein

LXN Protein Human 重组人 Latexin / LXN / TCI 蛋白

S100A9重组人 S100A9 / CAGB / P14 蛋白 Protein

小鼠肺微血管内皮细胞大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PPARγC1α)试剂盒 ，英文名
： PPARγC1α ELISA Kit

Rat 6 keto prostaglandin F1a (6-keto-PGF1a) ELISA Kit 大鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)试剂盒

RatAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit 大鼠抗核膜糖蛋白210抗体(gp210)试剂盒 进口分装

CLIAKitforeNOSELISAKit大鼠内皮型合成酶

细胞氯乙酰基转移酶(CAT)报告基因活性同位素薄层色谱(TLC)试剂盒20次

RatLeptospiraIgG,LepIgGELISAKit大鼠钩端IgG(LepIgG)试剂盒

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。