老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

小鼠肠微血管内皮分离自肠道组织；肠道指的是从胃幽门至的消化管
。肠是消化管中长的一段
，也是功能重要的一段
。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的
，大肠主要浓缩食物残渣，形成粪便，再通过直肠经排出体外。肠道堪称身体劳累的器官——每天不停地消化
、吸收食物，以提供足够的养分，其实它的功能还远不止此——它还是机体内大的微生态系统。微血管是极细微的血管，管径平均为6-9μm
，连于动、静脉之间，互相连接成网状。微血管壁薄，管径较小，血流很慢，通透性大。其功能是利于血液与组织之间进行物质交换。其管壁主要由一层内皮细胞构成


，在内皮外面有一薄层结缔组织
。另外还常可见到一种扁而有突起的细胞贴在微血管的管壁外面
，称为周细胞。

方法简介

：

公司实验室分离的小鼠肠微血管内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肠微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%

；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

猪瘦素试剂盒   猪瘦素试剂盒   规格型号：96T/48T   猪瘦素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源
：试剂盒（进口分装）
，产品别名：猪瘦素试剂盒
、猪瘦素eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月
。

猪食欲素受体试剂盒   猪食欲素受体试剂盒   规格型号
：96T/48T   猪食欲素受体试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源

：试剂盒（进口分装），产品别名
：猪食欲素受体试剂盒、猪食欲素受体eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月
。

猪食欲素试剂盒   猪食欲素试剂盒   规格型号：96T/48T   猪食欲素试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源

：试剂盒（进口分装）
，产品别名：猪食欲素试剂盒、猪食欲素eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

猪试剂盒   猪试剂盒   规格型号：96T/48T   猪试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源
：试剂盒（进口分装），产品别名
：猪试剂盒、猪eisa试剂盒   保存条件

：2-8℃   保质期
：6个月。

猪食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA 试剂盒

Human somelysin-3 (ST2) ELISA Kit 人基质裂解素(ST2)试剂盒

GuineapigovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISAKit 豚鼠卵清蛋白特异性IgE(OVAsIgE)试剂盒 进口分装

CLIAKitforANG-2(HumanAngiopoietin2)ELISAKit人血管生成素2

血液酶1(PON1)芳香酯酶活性比色法定量试剂盒

PorcineE-SelectinELISAKit猪E选择素(E-Selectin/CD62E)试剂盒

ERBB2重组食蟹猴 HER2 / ErbB2 蛋白 (His 标签) Protein

IGFBP-3 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3 0.5mgIGFBP-3 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3)C-term 胰岛素样生长因子结合蛋白-3抗原

MAP2K2重组人 MEK2 / MAP2K2 / MKK2 蛋白 (GST 标签) Protein

B3GNT6 Protein Human 重组人 B3GNT6 蛋白 (aa 44-384, His 标签)

KLRB1A Protein Mouse 重组小鼠 NKR-P1A / Klrb1a 蛋白 (His 标签)

IGFBP-3 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3 0.5mgIGFBP-3 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3)C-term 胰岛素样生长因子结合蛋白-3抗原

B3GNT6 Protein Human 重组人 B3GNT6 蛋白 (aa 44-384, His 标签)

ERBB2重组食蟹猴 HER2 / ErbB2 蛋白 (His 标签) Protein

KLRB1A Protein Mouse 重组小鼠 NKR-P1A / Klrb1a 蛋白 (His 标签)

MAP2K2重组人 MEK2 / MAP2K2 / MKK2 蛋白 (GST 标签) Protein

小鼠肠微血管内皮细胞大鼠核转录因子κB(NFκB)试剂盒

，英文名
： NFκB ELISA Kit

Rabbit noradrenaline (NA) ELISA Kit 兔去甲(NA)试剂盒

汉坦病毒Ⅱ型(HTV-Ⅱ)核酸试剂盒(-PCR法) 48T

CLIAKitforMousec-fosELISAKit小鼠c-fos

体液肌酐(CREATININE)酶连续反应比色法定量试剂盒20次

ELISAKit12-HETE人12羟二十烷四烯酸