細胞簡介 ：

小鼠腸神經脊幹分離腸組織 ；神經脊幹細胞（neural crest stem cells ，NCSC） ，即外周神經係統幹細胞 ，起源於胚胎期的神經管背側 ，與中樞神經係統幹細胞在形態學上有著顯著不同 ，NCSC可表達低親和力神經營養因子受體p75NTR而不能分化出少突膠質細胞 ，而中樞神經係統幹細胞與之恰好相反 。NCSC可在不同部位分化出多種組織 ，如神經元 、神經膠質 、黑色素細胞 、內分泌細胞 、平滑肌 、骨骼肌及骨等 ，其中可特異性分化出腸神經係統中神經元和神經膠質的NCSC ，被稱為腸神經脊幹細胞（gut neural crest stem cells ，GNCSC） 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠腸神經脊幹采用-膠原酶聯合消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠腸神經脊幹經Nestin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含B-27 Supplement 、EGF 、bFGF 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態 球形

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠3-羥基-3-甲基戊二酰合酶(HMGCS)檢測試劑盒  ，英文名 ： HMGCS ELISA Kit

Mouse somal cell derived factor 1A (SDF-1a/CXCL12) ELISA Kit 小鼠基質細胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)檢測試劑盒

MouseColonCancerAigen,CCAELISAKit 小鼠結腸癌抗原(CCA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumaeceptorforadvancedglycationendproducts,RAGE/AGERELISAKit人晚期糖基化終末產物受體

通用型豬沙門氏菌(SwineSalmonella)試劑盒20次

ELISAKitvisfatin大鼠內脂素/內髒脂肪素

IL34重組小鼠 IL-34 蛋白 Protein

Ceruloplasmin peptide 銅藍蛋白抗原 0.5mgCeruloplasmin peptide 銅藍蛋白抗原

ISG15重組人 ISG15 / G1P2 蛋白 (mature form) Protein

CROT Protein Human 重組人 CROT 蛋白 (474 Leu/Val, His 標簽)

FGFR4 Protein Mouse 重組小鼠 FGFR4 / CD334 蛋白

Ceruloplasmin peptide 銅藍蛋白抗原 0.5mgCeruloplasmin peptide 銅藍蛋白抗原

CROT Protein Human 重組人 CROT 蛋白 (474 Leu/Val, His 標簽)

IL34重組小鼠 IL-34 蛋白 Protein

FGFR4 Protein Mouse 重組小鼠 FGFR4 / CD334 蛋白

ISG15重組人 ISG15 / G1P2 蛋白 (mature form) Protein

小鼠羥脯酸(Hyp)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human talin (Gelson) ELISA Kit 人凝膠原蛋白(gelson)檢測試劑盒

Humanlowdensitylipoprotein,LDLELISAKit 人低密度脂蛋白(LDL)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

GuineaPigplasmin-aiplasmincomplex,PAP檢測試劑盒豚鼠纖溶酶抗纖溶酶複合物(PAP)檢測試劑盒規格：96T/48T

真菌/酵母細胞內氧化應激活性氧(ROS)高質綠色熒光測定試劑盒20次

MouseBonemorphogeneticproteieceptorⅡ,BMPR-ⅡELISAKit小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠腸神經脊幹細胞小鼠硫氧還蛋白還原酶(xR)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠硫氧化還原蛋白(x)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠流行性出血熱抗體（EHF-Ab）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠0脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PIAb-IgG/IgM)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。