老哥俱乐部

实验报告


：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清


，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min

；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次


，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠表皮角化分离自皮肤组织；表皮位于动物皮肤的外层
，由胚胎时期外胚层形成
，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层
、棘层
、颗粒层、透明层和角质层。表皮角化细胞（KC）是构成表皮的主要细胞成分，在体内处于不断增殖过程中，分裂的角化细胞主要位于其基底层

，少数位于棘细胞层
。随着向表层的推移，细胞的分化程度逐渐增加，并丧失分裂活性。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠表皮角化上皮先消化


、后-胶原酶混合消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠表皮角化上皮经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌

、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂

、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

大鼠乙醇脱氢酶1(ADH1)检测试剂盒
，英文名： ADH1 ELISA Kit

Mouse terminal compleme complex C5b-9 (TCC C5b-9) ELISA Kit 小鼠末端补体复合物C5b-9(TCC C5b-9)检测试剂盒

MouseSomalcellderivedfactor1β,SDF-1βELISAkit 小鼠基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumandecay-acceleratingfactor,DAFELISAKit人降解加速因子

细胞Akt3/PKBγ激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

PPAR-γ大鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ

PVRL2重组人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 蛋白 (Fc 标签) Protein

黏病毒耐药蛋白1(MX1)重组蛋白 Recombinant Myxovirus Resistance 1 (MX1)

IFNA8重组人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白 Protein

CRABP2 Protein Human 重组人 CRABP2 蛋白

HA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

黏病毒耐药蛋白1(MX1)重组蛋白 Recombinant Myxovirus Resistance 1 (MX1)

CRABP2 Protein Human 重组人 CRABP2 蛋白

PVRL2重组人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 蛋白 (Fc 标签) Protein

HA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

IFNA8重组人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白 Protein

小鼠热休克蛋白20(Hsp-20)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human urinary protein (UP) ELISA Kit 人尿蛋白(UP)检测试剂盒

HumancytokeratinHighMolecularWeight,CK-HMWELISAKit 人高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

GuineapigleukoieneD4,LT-D4检测试剂盒豚鼠白三烯D4(LTD4)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞壁可溶性总蛋白制备试剂盒20次

MouseCA724ELISAKit小鼠标志物(CA724)检测试剂盒规格

：96T/48T

小鼠表皮角化上皮细胞小鼠脑素/脑尿肽(BNP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠脑脊髓病毒（TMEV）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠脑红蛋白(NGB)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠脑啡肽（ENK）检测试剂盒   96T   试剂盒   组装/原装