老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠表皮黑色素分离自皮肤组织
；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成
，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层、棘层
、颗粒层、透明层和角质层。黑色素细胞是皮肤产生和维持色素的主要细胞
，起源于神经嵴，后逐渐迁移到表皮和毛囊。黑色素细胞的异常或功能的失常导致了一系列难治性色素性疾病的发生，如、黄褐斑等。表皮黑色素细胞主要分布于位于表皮的基底层

，与表皮细胞共同组成表皮黑素单位
，其主要功能是产生黑素小体保护皮肤免受损害。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠表皮黑色素先消化
、后-胶原酶混合消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠表皮黑色素经S-100免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 长梭形

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%
；CO2，5%

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠补体片断5(C5)检测试剂盒 ，英文名
： C5 ELISA Kit

Mouse TGF- beta inducible early gene 1 (TIEG1) ELISA Kit 小鼠TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)检测试剂盒

ELISA 小鼠β内啡肽(mouse β-EP)  进口分装

CLIAKitforLambda-IgLC(Humanlambdaimmunoglobulinlightchain)ELISAKit轻链lambda

通用型WNV(WESTNILE)病毒定性检测试剂盒20次

ELISAKitC3鲑鱼补体蛋白3

DKK1重组恒河猴 DKK-1 / Dkk1 蛋白 (256 Asn/Gln, His 标签) Protein

p38 MAPK/MKK3/MAPKK14 原活化蛋白激酶p38(抗原 0.5mgp38 MAPK/MKK3/MAPKK14 原活化蛋白激酶p38(抗原)

NETO1重组人 NETO1 / BTCL1 蛋白 Protein

CRABP1 Protein Human 重组人 CRABP1 / RBP5 蛋白

FGFR2 Protein Mouse 重组小鼠 FGFR2 / CD332 蛋白

p38 MAPK/MKK3/MAPKK14 原活化蛋白激酶p38(抗原 0.5mgp38 MAPK/MKK3/MAPKK14 原活化蛋白激酶p38(抗原)

CRABP1 Protein Human 重组人 CRABP1 / RBP5 蛋白

DKK1重组恒河猴 DKK-1 / Dkk1 蛋白 (256 Asn/Gln, His 标签) Protein

FGFR2 Protein Mouse 重组小鼠 FGFR2 / CD332 蛋白

NETO1重组人 NETO1 / BTCL1 蛋白 Protein

小鼠热休克蛋白27(HSP-27)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human guanine nucleotide dissociation inhibitor (GDI) ELISA Kit 人鸟苷酸解离抑制因子(GDI)检测试剂盒

Humangalanin,GALELISAKit 人甘肽/甘素(GAL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

guineapigLeukoieneB4,LT-B4检测试剂盒豚鼠白三烯B4(LTB4)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞壁可溶性总蛋白制备试剂盒20次

Mousecalcitoningenerelatedpeptide,CGRPELISAKit小鼠降钙素基因相关肽(CGRP)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠表皮黑色素细胞小鼠脑肽   英文名称

：   brainnaiureticpep tid   规格：      英文缩写
：   BNP

小鼠N端前脑素   英文名称

：   N-terminal pro-brain naiuretic peptide   规格
：      英文缩写：   -proBNP

小鼠骨唾液酸蛋白   英文名称：   bone sialoprotein   规格：      英文缩写：   BSP

小鼠尿素氮   英文名称：   Mouse Blood Urea Niogen   规格
：      英文缩写：   BUN

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1


：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。