細胞簡介 ：

小鼠表皮黑色素分離自皮膚組織 ；表皮位於動物皮膚的外層 ，由胚胎時期外胚層形成 ，具有抗摩擦和抗損傷的作用 。表皮是皮膚的淺層結構 ，由複層扁平上皮構成 。從基底層到表麵可分為五層 ，即基底層 、棘層 、顆粒層 、透明層和角質層 。黑色素細胞是皮膚產生和維持色素的主要細胞 ，起源於神經脊 ，後逐漸遷移到表皮和毛囊 。黑色素細胞的異常或功能的失常導致了一係列難治性色素性疾病的發生 ，如、黃褐斑等 。表皮黑色素細胞主要分布於位於表皮的基底層 ，與表皮細胞共同組成表皮黑素單位 ，其主要功能是產生黑素小體保護皮膚免受損害 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠表皮黑色素先消化 、後-膠原酶混合消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠表皮黑色素經S-100免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 長梭形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95%；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠補體片斷5(C5)檢測試劑盒  ，英文名 ： C5 ELISA Kit

Mouse TGF- beta inducible early gene 1 (TIEG1) ELISA Kit 小鼠TGF-β誘導早期基因1(TIEG1)檢測試劑盒

ELISA 小鼠β內啡肽(mouse β-EP)  進口分裝

CLIAKitforLambda-IgLC(Humanlambdaimmunoglobulinlightchain)ELISAKit輕鏈lambda

通用型WNV(WESTNILE)病毒定性檢測試劑盒20次

ELISAKitC3鮭魚補體蛋白3

DKK1重組恒河猴 DKK-1 / Dkk1 蛋白 (256 Asn/Gln, His 標簽) Protein

p38 MAPK/MKK3/MAPKK14 原活化蛋白激酶p38(抗原 0.5mgp38 MAPK/MKK3/MAPKK14 原活化蛋白激酶p38(抗原)

NETO1重組人 NETO1 / BTCL1 蛋白 Protein

CRABP1 Protein Human 重組人 CRABP1 / RBP5 蛋白

FGFR2 Protein Mouse 重組小鼠 FGFR2 / CD332 蛋白

p38 MAPK/MKK3/MAPKK14 原活化蛋白激酶p38(抗原 0.5mgp38 MAPK/MKK3/MAPKK14 原活化蛋白激酶p38(抗原)

CRABP1 Protein Human 重組人 CRABP1 / RBP5 蛋白

DKK1重組恒河猴 DKK-1 / Dkk1 蛋白 (256 Asn/Gln, His 標簽) Protein

FGFR2 Protein Mouse 重組小鼠 FGFR2 / CD332 蛋白

NETO1重組人 NETO1 / BTCL1 蛋白 Protein

小鼠熱休克蛋白27(HSP-27)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human guanine nucleotide dissociation inhibitor (GDI) ELISA Kit 人鳥苷酸解離抑製因子(GDI)檢測試劑盒

Humangalanin,GALELISAKit 人甘肽/甘素(GAL)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

guineapigLeukoieneB4,LT-B4檢測試劑盒豚鼠白三烯B4(LTB4)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母細胞壁可溶性總蛋白製備試劑盒20次

Mousecalcitoningenerelatedpeptide,CGRPELISAKit小鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠表皮黑色素細胞小鼠腦肽   英文名稱 ：   brainnaiureticpep tid   規格 ：      英文縮寫 ：   BNP

小鼠N端前腦素   英文名稱 ：   N-terminal pro-brain naiuretic peptide   規格 ：      英文縮寫 ：   -proBNP

小鼠骨唾液酸蛋白   英文名稱 ：   bone sialoprotein   規格 ：      英文縮寫 ：   BSP

小鼠尿素氮   英文名稱 ：   Mouse Blood Urea Niogen   規格 ：      英文縮寫 ：   BUN

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。