老哥俱乐部

细胞简介：

兔棕色脂肪干分离自棕色脂肪组织；动物体内存在棕色和白色两种脂肪
，白色脂肪堆积在皮下，负责储存多余热量
；棕色脂肪负责分解引发肥胖的白色脂肪
，将后者转化成二氧化碳、水和热量，本身不储存热量

。棕色脂肪组织呈棕色
，其特点是组织中有丰富的毛细血管，脂肪细胞内散着许多小脂滴
，线粒体大而丰富，核圆形
，位于细胞中央
，这种脂肪细胞也称为多泡脂肪细胞。棕色脂肪组织在成年动物极少
，新生儿及冬眠动物较多
，在新生儿主要分布在肩胛间区、腋窝及颈后部等处。棕色脂肪组织仅在婴儿时期发挥作用，它们堆积在新生儿肩胛处，帮助维持体温
。随着年龄增长，棕色脂肪会逐渐消失。终，动物体内只残存少量棕色脂肪细胞，分布于颈部和锁骨。脂肪干细胞（ADSCs）是一种具有多向分化潜能的干细胞，主要恢复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生，恢复年轻面容的同时，身体机能也得到充分改善，有效改善亚健康

、早衰等疾病
，由内而外真正的有效抵抗衰老

。脂肪干细胞具有很多优点：①具有自我更新及多向分化的潜能；②来源充足
；③对供区的创伤较小；④获得率及体外扩增速率高
。脂肪干细胞是目前被广泛应用于组织工程领域中理想的种子细胞。

方法简介：

实验室分离的兔棕色脂肪干采用胶原酶消化法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔棕色脂肪干经CD90免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传5代左右

；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气
，95%；CO2，5%

兔棕色脂肪干体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小

；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠平足蛋白(PDPN)检测试剂盒 
，英文名： PDPN ELISA Kit

Mouse thrombomodulin (TM) ELISA Kit 小鼠血栓调节蛋白(TM)检测试剂盒

RatSubstanceP,SPELISAKit 大鼠P物质(SP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGP-BB(HumanGlycogenphosphorylaseBB)ELISAKit人糖原0酸化酶同工酶BB

细胞调亡DNA条带检测试剂盒10次

Ratthyroxine,T4ELISAKit大鼠甲状腺素(T4)检测试剂盒规格：96T/48T

IL6ST重组小鼠 IL6ST / gp130 / CD130 蛋白 Protein

alpha Adaptin/AP1 衔接蛋白α抗原 0.5mgalpha Adaptin/AP1 衔接蛋白α抗原

C1D重组人 C1D 蛋白 (GST 标签) Protein

CPLX2 Protein Human 重组人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白

BST1 Protein Rat 重组大鼠 CD157 / BST1 蛋白 (Fc 标签)

胞外超氧化物歧化酶(SOD3)重组蛋白 Recombinant Superoxide Dismutase 3, Extracellular (SOD3)

CPLX2 Protein Human 重组人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白

IgG2a重组小鼠 IgG2a-Fc 蛋白 Protein

CD59 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白

AKR1C2重组人 AKR1C2 蛋白 Protein

小鼠绒毛膜(CG)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human enkephalin (ENK) ELISA Kit 人脑啡肽(ENK)检测试剂盒

HumanVacuolatingcytotoxinA,VacAELISAKit 人空泡毒素相关蛋白A(VacA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

guineapigImmunoglobulinE,IgE检测试剂盒豚鼠免疫球蛋白E(IgE)检测试剂盒规格
：96T/48T

真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性超敏荧光定量检测试剂盒20次

MousecardiacoponinⅠ,cTn-ⅠELISAKit小鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)检测试剂盒规格：96T/48T

兔棕色脂肪干细胞小鼠鸟酸脱羧酶   英文名称：   Mouse Ornithine Decarboxylase   规格：      英文缩写：   ODC

小鼠卵清蛋白特异性IgE   英文名称
：   Mouse ovalbumin specific Immunoglobulin E   规格

：      英文缩写：   OVA sIgE

小鼠氧化低密度脂蛋白   英文名称：   Mouse oxidized Low Density Lipoprotein   规格：      英文缩写
：   oxLDL

小鼠骨保护素   英文名称：   Osteoprotegerin   规格：      英文缩写
：   OPG

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。