老哥俱乐部

细胞简介：

兔棕色前脂肪分离自棕色脂肪组织
；动物体内存在棕色和白色两种脂肪
，白色脂肪堆积在皮下，负责储存多余热量
；棕色脂肪负责分解引发肥胖的白色脂肪，将后者转化成二氧化碳、水和热量，本身不储存热量
。棕色脂肪组织呈棕色，其特点是组织中有丰富的毛细血管
，脂肪细胞内散着许多小脂滴
，线粒体大而丰富，核圆形，位于细胞中央，这种脂肪细胞也称为多泡脂肪细胞
。棕色脂肪组织在成年动物极少
，新生儿及冬眠动物较多，在新生儿主要分布在肩胛间区、腋窝及颈后部等处。棕色脂肪组织仅在婴儿时期发挥作用，它们堆积在新生儿肩胛处，帮助维持体温。随着年龄增长
，棕色脂肪会逐渐消失
。终，动物体内只残存少量棕色脂肪细胞，分布于颈部和锁骨。脂肪组织在体内含有两种主要的细胞：一种是在胞浆内积聚脂滴的成熟脂肪细胞；另一种是虽未在胞浆内积聚脂滴但有这种潜能的前脂肪细胞。前脂肪细胞呈梭形
，有分裂和增殖的能力
；成熟的脂肪细胞呈圆形，已经失去了分裂及增殖的能力。由于前脂肪细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分化能力的特异化前体细胞
，与肥胖有着非常密切的关系。前脂肪细胞是一种类成纤维细胞，在演变的过程中不断吸收脂质
，终成为成熟的脂肪细胞。前脂肪细胞对外界机械损伤的抵抗力较强，可望成为软组织缺损的有益填充物
。

方法简介
：

实验室分离的兔棕色前脂肪采用胶原酶消化法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔棕色前脂肪经油红O染色检测，纯度可达90%以上

，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂

、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性
：可传5代左右

；3代以内状态佳

消化液
：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%；CO2，5%

兔棕色前脂肪体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6

、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸氧化酶4(NOX4)检测试剂盒 ，英文名： NOX4 ELISA Kit

Mouse thrombopoietin (TPO) ELISA Kit 小鼠血小板生成素(TPO)检测试剂盒

RatcoagulationfactorⅩ,FⅩELISAKit 大鼠Ⅹ(FⅩ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGM1(Humanai-gangliosesideaibody)ELISAKit人抗抗体

细胞二脂酰甘油(DAG)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒20次

RatSubstanceP,SPELISAKit大鼠P物质(SP)检测试剂盒规格：96T/48T

CD200重组人 CD200 / OX-2 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

粒细胞集落刺激因子(GCSF)重组蛋白 Recombinant Colony Stimulating Factor 3, Granulocyte (GCSF)

PSMA3重组人 PSMA3 / Proteasome 20S alpha 3 蛋白 Protein

CPB2 Protein Human 重组人 Carboxypeptidase B2 / CPB2 蛋白

NP Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP)

粒细胞集落刺激因子(GCSF)重组蛋白 Recombinant Colony Stimulating Factor 3, Granulocyte (GCSF)

CPB2 Protein Human 重组人 Carboxypeptidase B2 / CPB2 蛋白

CD200重组人 CD200 / OX-2 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

NP Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP)

PSMA3重组人 PSMA3 / Proteasome 20S alpha 3 蛋白 Protein

小鼠绒毛膜β(β-CG)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human brain g peptide (BGP/Gehrelin) ELISA Kit 人脑肠肽(BGP/Gehrelin)检测试剂盒

Humanvionectin,VELISAKit 人玻连蛋白/体外粘连蛋白(VN/CD51+CD61)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

guineapigImmunoglobulinA,IgA检测试剂盒豚鼠免疫球蛋白A(IgA)检测试剂盒规格

：96T/48T

真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒20次

Mousecardioophln1,CT-1ELISAKit小鼠心肌营养素1(CT-1)检测试剂盒规格：96T/48T

兔棕色前脂肪细胞小鼠型纤溶酶原激活物受体   英文名称：   urokinase-plasmingen activator receptor   规格：      英文缩写：   uPA-R

小鼠超敏感度促甲状腺素   英文名称

：   Mouse ulasensitive Thyroid Stimulating Hormone   规格
：      英文缩写
：   U.TSH

线粒体解偶联蛋白2   英文名称：   Mouse Mitochondrial Uncoupling Protein 2   规格
：      英文缩写：   UCP2

小鼠血管细胞粘附分子-1   英文名称
：   vascuiar endothelial cells adhesion molecule 1   规格：      英文缩写：   VCAM-1

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。