老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

兔神经干分离自脑皮层组织
；大脑分左右两个半球，大脑皮质（灰质）覆盖着每个大脑半球的大部分
，它是神经元胞体集中的地方
。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质。每一个半球都有三个面，即外侧面（约占整个皮质面积的1/3）、内侧面和底面（占2/3的面积）；半球表面有很多深浅不等的沟或裂

，沟或裂之间的隆起叫回
，它们大大增加了大脑的表面积
；大脑外侧面重要的沟、裂有大脑外侧裂
、顶枕裂和中央沟
。由于三沟裂之界隔
，使大脑皮质组分为额叶

、顶叶
、颞叶
、枕叶四大部分。神经干细胞具有分化为神经神经元

、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力，能自我更新，并足以提供大量脑组织细胞的细胞群。神经干细胞是一类具有分裂潜能和自更新能力的母细胞，它可以通过不对等的分裂方式产生神经组织的各类细胞。需要强调的是，在脑脊髓等所有神经组织中，不同的神经干细胞类型产生的子代细胞种类不同

，分布也不同。神经干细胞作为干细胞的一种
，它具有其它所有干细胞的基本特征
：具有自我维持和自我更新能力，具有多种分化潜能，具有分化为本系统大部分类型细胞的能力，这种自我更新和分化潜能可以维持相当长的时间甚至终生，对损伤和疾病具有反应能力。神经干细胞在疾病、损伤状态下具有增殖、迁移，并向神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的能力，已成为神经系统损伤修复和再生研究的热点
，体外建立稳定的神经干细胞培养模型是其基础和临床应用的前提。神经干细胞在培养3-4d后，可形成神经球
，神经球在培养基中呈悬浮生长，予以更换半量培基，1周后用吸管轻柔吹打球形克隆成为小的神经球和单细胞悬液
，将部分细胞接种到新的培养瓶中，2×105个细胞/瓶，每7-10d传代1次，每隔3d离心更换半量培养基1次
，培养条件不变。

方法简介
：

实验室分离的兔神经干采用消化后差速贴壁，结合神经干细胞专用培养基培养筛选制备而来
，总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔神经干经Nestin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基：含B-27 Supplement、EGF、bFGF

、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：悬浮

细胞形态


：球形

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%，Accutase

培养条件：气相：空气，95%
；CO2

，5%

兔神经干体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项


：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠C-肽   英文名称

：   C-peptide   规格：      英文缩写：   C-peptide

小鼠心肌肌钙蛋白   英文名称：   cardiac oponin 1   规格：      英文缩写
：   cTn1

小鼠粒细胞集落刺激因子   英文名称：   granulocyte colony-stimulating factor   规格：      英文缩写：   G-CSF

小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子   英文名称：   granulocyte-macrophage colony-stimulating factor   规格
：      英文缩写：   GM-CSF

小鼠谷酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human retinoblastoma tumor suppressor protein (pRB) ELISA Kit 人视网膜母细胞瘤抑制蛋白(pRB)试剂盒

HumanleukoieneD4,LT-D4ELISAKit 人白三烯D4(LTD4)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-septolysinO,ASO试剂盒人抗链球菌溶血素O/抗O(ASO)试剂盒规格：96T/48T

植物纤维素酶(cellulase)活性比色法定量试剂盒20次

HumanoponinⅠ，Tn-ⅠELISAKit人肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)试剂盒规格
：96T/48T

HA重组甲型流感 H9N2 (A/HongKong/1073/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PAR-2 OP(Protease-activated receptors-2 Activating Orange-peptide 0.5mgPAR-2 OP(Protease-activated receptors-2 Activating Orange-peptide) 蛋白酶激活受体-2桔抗肽

VEGFA重组人 VEGF 183 / VEGF-A 蛋白 Protein

FASLG Protein Human 重组人 Fas Ligand / FASLG / CD95L 蛋白

CD80 Protein Human 重组人 CD80 / B7-1 蛋白

PAR-2 OP(Protease-activated receptors-2 Activating Orange-peptide 0.5mgPAR-2 OP(Protease-activated receptors-2 Activating Orange-peptide) 蛋白酶激活受体-2桔抗肽

FASLG Protein Human 重组人 Fas Ligand / FASLG / CD95L 蛋白

HA重组甲型流感 H9N2 (A/HongKong/1073/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

CD80 Protein Human 重组人 CD80 / B7-1 蛋白

VEGFA重组人 VEGF 183 / VEGF-A 蛋白 Protein

兔神经干细胞大鼠巨嗜细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)试剂盒 ，英文名
： MCP-1/CCL2/MCAF ELISA Kit

Mouse haptoglobin / haptoglobin (Hpt/HP) ELISA Kit 小鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)试剂盒

Mousephospho-exacellularsignal-regulatedkinase,pERKELISAKit 小鼠0酸化细胞外信号调节激酶(pERK)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanparamyxovirusparotitisIgGELISAKit人腮腺病毒IgG

同位素标记放射活性TCA试剂盒20次

ELISAKitAMPK大鼠0酸化腺苷酸活化蛋白激酶