老哥俱乐部

细胞简介：

兔尿道平滑肌分离自尿道管组织
；尿道是从膀胱通向体外的管道。起自膀胱的尿道内口，止于尿道外口
，行程中通过前列腺部、膜部和阴茎海绵体部

，尿道在尿道膜部有一环横行纹肌构成的括约肌
，称为尿道外括约肌，由意识控制。尿道有三个解剖上的较狭部和膨大部
，前者分别位于外口、膜部和内口，后者位于舟状窝、球部和前列腺部
。尿道壁为粘膜层
、粘膜下层和肌肉层所组成
。在前尿道的外面，还包有丰富的弹力纤维和平滑肌纤维的尿道海绵体

。尿道粘膜上皮在前列腺部为移行上皮(近膀胱部)
，一部分为多列或复层柱状上皮，在有尿道海绵体的一部分尿道，主要为复层柱状上皮
，在皱襞上也有单层柱状上皮。特别在舟状窝内有许多环状细胞，舟状窝的远端部开始有未角化的复层鳞状上皮。粘膜下层血液供应丰富，主要为结缔组织。肌肉层有纵行肌和外环形肌
。

方法简介：

公司实验室分离的兔尿道平滑肌采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法
，并通过平滑肌细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的兔尿道平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定

，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次；

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3-5代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一

、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5

、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠极低密度脂蛋白受体(VLDLR)检测试剂盒 
，英文名： VLDLR ELISA Kit

Mouse tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand 1 (AIL-R1) ELISA Kit 小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(AIL-R1)检测试剂盒

RatOsteoprotegerinLigand,OPGLELISAKit 大鼠骨保护素配体(OPGL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFDPELISAKit大鼠血纤蛋白原降解产物

细胞基质金属蛋白酶(MMP-3)活性荧光定量检测试剂盒20次

ratNoradrenaline,NAELISAKit大鼠去甲(NA)检测试剂盒规格：96T/48T

NOV重组食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV 蛋白 Protein

IGFBP-2 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 2 0.5mgIGFBP-2 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 2) 胰岛素样生长因子结合蛋白-2(多肽)

CCL8重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签) Protein

CNPY2 Protein Human 重组人 CNPY2 蛋白

CHODL Protein Mouse 重组小鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白

IGFBP-2 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 2 0.5mgIGFBP-2 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 2) 胰岛素样生长因子结合蛋白-2(多肽)

CNPY2 Protein Human 重组人 CNPY2 蛋白

NOV重组食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV 蛋白 Protein

CHODL Protein Mouse 重组小鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白

CCL8重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签) Protein

小鼠生长调节致癌基因β/黑素瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human immunoglobulin G receptor Fc section III (Fc gamma R III /CD16) ELISA Kit G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)检测试剂盒

Humanmyelinbasicprotein,MBPELISAKit 人髓0脂碱性蛋白(MBP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

EquineImmunoglobulinE,IgE检测试剂盒马免疫球蛋白E(IgE)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母β-(β-AMYLASE)活性DNS比色法定量检测试剂盒20次

MouseCoisolELISAKit小鼠(Coisol)检测试剂盒规格：96T/48T

兔尿道平滑肌细胞小鼠绒毛膜β(β-CG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠性激素结合球蛋白(SHBG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠脱氢表雄S7(DHEA-S7)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠脱氢表雄(DHEA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1

：2传代

。

9.注意


： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。