實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

兔腦膜分離自腦膜組織 ；腦膜是顱骨與腦間的隔膜 ，一共有三層 ，由外向內為硬腦膜 、蛛網膜和軟腦膜 。硬腦膜 ，是一厚而堅韌的雙層膜 ，外層是顱骨內麵的骨膜 ，僅疏鬆地附於顱蓋 ，特別是在枕部與顳部附著更疏鬆 ，稱為骨膜層 。蛛網膜是一層半透明的膜，位於硬腦膜深部 ，其間有潛在性腔隙為硬腦膜下隙。軟腦膜是緊貼於腦表麵的一層透明薄膜 ，並伸入溝裂 。在腦室壁的某些部位 ，軟腦膜及其血管與室管膜上皮共同形成脈絡組織 。脈絡組織中的血管反複分支成叢 ，突入腦室形成脈絡叢 。腦膜細胞圍繞著大腦 ，參與中樞神經係統的正常發育 ，能穩定腦軟膜表麵的細胞外基質 、組織放射狀膠質細胞網絡和小腦皮層分層結構 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔腦膜成纖維采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔腦膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳3代左右 ；1-2代以內狀態佳

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔腦膜成纖維體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠乳酸脫氫酶A(LDHA)檢測試劑盒  ，英文名 ： LDHA ELISA Kit

Mouse angiotensin I (Ang- I) ELISA Kit 小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)檢測試劑盒

RatChorionicGonadoophinβ,β-CGELISAKit 大鼠絨毛膜β(β-CG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGzms-B(HumangranzymesB)ELISAKit人顆粒酶B

細胞同酸激酶(PK)總活性比色法定量檢測試劑盒20次

RatUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAKit大鼠型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

DLL4重組小鼠 DLL4 / Delta4 蛋白 Protein

CC16(Clara cell protein 16 0.5mgCC16(Clara cell protein 16) peptide 克拉拉細胞蛋白(Clara細胞分泌蛋白)抗原

NGFR重組人 NGFR/ P75 蛋白 Protein

HK3 Protein Human 重組人 Hexokinase-3 / HK3 蛋白 (His & GST 標簽)

IL17RA Protein Rat 重組大鼠 IL17RA / IL17R 蛋白 (Fc 標簽)

CC16(Clara cell protein 16 0.5mgCC16(Clara cell protein 16) peptide 克拉拉細胞蛋白(Clara細胞分泌蛋白)抗原

HK3 Protein Human 重組人 Hexokinase-3 / HK3 蛋白 (His & GST 標簽)

DLL4重組小鼠 DLL4 / Delta4 蛋白 Protein

IL17RA Protein Rat 重組大鼠 IL17RA / IL17R 蛋白 (Fc 標簽)

NGFR重組人 NGFR/ P75 蛋白 Protein

小鼠NOD樣受體-2(NOD-2)檢測試劑盒 96T/48T

Rat hyaluronic acid (HA) ELISA Kit 大鼠透明質酸(HA)檢測試劑盒

HumanCoisolELISAKit 人(Coisol)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCollagenaoaibody,CLA檢測試劑盒人抗膠原蛋白抗體(CLA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織3-羥-3-甲戊二酰(HMG-COA)還原酶比色法定量檢測試劑盒20次

Humaecombinationactivatinggene2,RAG-2ELISAKit人重組激活基因2(RAG-2)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔腦膜成纖維細胞兔內皮素-1(rabbit ET-1)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

兔降解產物(rabbit FDP)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

兔促卵泡素(rabbit FSH)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

兔堿性成纖維生長因子(rabbit b-FGF/FGF-2)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝